Способ определения пролиферативной способности лимфоцитов

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 119) 4 0 О И 33/49 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ К АВТ рта с эфир сируют в смеси с окрашивают по Рома микроскопируют при нии 90, Подсчитьва фоцитов, дифференци фоциты, как клетки 12 мкм с круглым я цитоплазмой, среди метром менее 10 мк цитоплазматическим лые лимфоциты - ди ьп нова РАТИВс узким ободком цитоплазмы. При содержании в периферической крови больших лимфоцитов в пределах 8-227. делают вывод о нормальном уровне иммунологической реактивности, более 23%свидетельствует о развитии реактивных сдвигов на антиген, ниже 8%снижение иммунологической реактивности организма. Способ дает точностьдо 89%. дици- едназначен ки нологического та челове а. Цель изобретен ба исследования и уп ение спо сть его о ож рокого прим равоохранен тном стекле ения ско Для отовято а предм рови, в азки ушивают на воздух ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Архангельский государствемедицинский институт(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОЛИФНОИ СПОСОБНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ(57) Изобретение относится к мне, точнее к иммунологии, и п овскому-Гимзе и общем увеличет в мазке 200 лимруя большие лимдиаметром 10- ром и развитой е лимфоциты диас высоким ядерно- отношением и маметром менее 8 мкмИзобретение относится к медицине,а именно к иммунологии,и может бытьиспользовано при оценке иммунологического статуса человекаЦель изобретения - упрощение способа исследования и возможность широкого его применения в практическомздравоохранении.Способ осуществляют следующим образам.На предметном стекле готовят мазки крови, высушивают на воздухе, фиксируют в смеси спирта с эфиром иокрашивают по Романовскому-Гимэе. Для 15фиксации и окрашивания мазков могутбыть использованы различные фиксаторы, в том числе этиловый и метиловь йспирты, и красители. Окрашенные мазки микроскопируют при общем увеличении 90, подсчитывают в мазке 200 лимФоцитов, дифференцируя большие лимфоциты как клетки диаметром 10-12 мкмс круглым ядром и развитой цитоплазмой, средние лимфоциты диаметром менее 1 О мкм с высоким ядерно-цитоплазматическим отношением и малые лимфоциты диаметром менее 8 мкм с узкимободком питоплазмы,Содержание в периферической кровибольших лимфоцитов в пределах 8-227характерно для человека с нормальнымуровнем иммунологической реактивности; увеличение больших лимфоцитовболее 23/. свидетельствует о развитииреактивных сдвигов на антиген; содер 35жанне больши., лимфоцитов ниже 8(от 0 до 5,11 ф 1,02 Х) регистрируетсяпри снижении иммунологической реактивности организма (совпадение в39,717 случаев),П р и м е р, При сравнительнойхарактеристике уровней содержаниябольших лимфоцитов и бласттрансформированных клеток в культуре в процессе обследования населения Европейского севера (иенцы, местные жителирусской национальности, родившиесяна севере, и прибывшее население)установлена идентичность количественного выражения названных показа 50 телей. Так, у ненцев среднегодовое содержание больших лимфоцитов в составе периферической крови находилось в пределах 14,76-1,08/ при уровне бласттранслормации лимфоцитов в куль туре 15,62 ф 1,68/.; у местных жителей изучаемые показатели равны соответственно 14, 11+ 0,99 и 15,38+1,427; у лиц, прибывших с юга, 12,58+1,17и 13,84 ф 1,491.Сравнительное изучение уровняспонтанной бласттрансформации лимфоцитов в различные сезоны года позволило установить значительное повышение данной способности лимфоцитов в период полярной ночи, В зимние месяцы степень бласттрансформации лимФоцитов у ненцев возросла до 19,37+ ф 1,37 Х, у местных и прибывших жителей соответственно до 19,35+0,92 и 19,83 ф 0,957. Подсчет содержания больших лимфоцитов в мазках крови, взятой одновременно с пробами для постановки реакции бласттрансформации, подтвердил аналогичность изучаемых показателей - уровень больших лимфоцитов повысился соответственно до 18,61 ф 0,98, 17,71+1,12 и 19,57 ф ь 1,427. Коррелятивный анализ показал достоверную прямую зависимость изучаемых показателей (ч=0,81; 0,73;0,85). Изучение предложенного показателя в процессе иммунизации людей живой интраназальной противогриппозной вакциной позволило подтвердить мнение об активизации процесса пролиферации лимфоцитов под воздействием антигена. Было показано, что уже на 7-е сутки после иммунизации резко увеличилось в крови содержание больших лимфоцитов (Рс 0,01) и уровня спонтанной бласттрансформации лимфоцитов в культуре (Рс 0,001). Так, у ненцев увеличение процента больших лимфоцитов отмечено в этот период с 18,61 ф 0,98 до 22,82+1,23, при ловышении процента трансформированных клеток в культуре с 19,370,71 до 23,31+1,85. Подобные соотношения отмечались у местных жителей (соответственно с 17,711, 12 до 22,01+0,797 и с 19,35+ 0,92 до 23,82.1,357) и прибывших на север с юга (соответственно с 19,57+1,42 до 23,51"- 1,527 и с 19,83+0,95 до 25,11 ф 1,621),Установлено, что предложенный показатель, также как и уровень бласттрансформации, коррелирует с титрами антител в отношении противогриппозных антигемагглютининов (ч=0,72), противобрюшнотифозных О-агглютининов (ч= =0,82) и противопаратифозных 0-агглютининов (ч=0,68) при вакцинации соответствующими вакцинами.1390568 цита. Формула изобретения Составитель Г.КрюковаРедактор Н.Рогулич Техред М,Дидык Корректор А.Тяско Заказ 1762/44 Тираж 847 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул, Проектная, 4 11 ри обследовании 93 детей со сниженной иммунологической реактивностью (часто болеющих респираторными заболеваниями - бронхитами, бронхопневмо ниями) был установлен факт дефицита сывороточного иммуноглобулина А. Изучение уровня Йролиферативной способности лимфоцитов показало, что у 77,47. обследованных наблюдается содержание больших лимфоцитов ниже 87. (7,84+0,127), а у 81,9 Х количество бласттрансформированных клеток составило 8,040,567. 15Лостоинством способа является сокращение времени получения результатов с 3-4 дней до 30 мин, максимальная простота, полностью исключающая многочисленные этапы получения клеток 20 и их культивирование, необходимость дорогостоящей аппаратуры, реактивов и специального помещения для соблюдения стерильности. Способ проверен на большом клиническом материале и пред лагается как экспресс-метод для оценки иммунологического статуса, для оценки уровня иммуногенности антигена, уровня иммунного ответа на антиген и наблюдения за динамикой реактивных сдвигов. Способ может бытьтакже рекомендован при оценке действия новых иммуномодуляторов, иммунодепрессоров и препаратов, стимулирующих иммунологическую реактивность.В условиях диспансерных осмотров идиспансерного наблюдения способ удобен как скрининг-тест для выявлениялиц с возможным наличием иммунодефиСпособ определения пролиферативной способности лимфоцитов путем исследования лимфоцитограммы, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, при исследовании лимфоцитограммы выявляют количество больших лимфоцитов и при содержании их менее 8 Х определяют снижение пролиферативной способности лимфоцитов, а при содержании выше 23/ - повышение пролиферативной способности лимфоцитов,