Способ диагностики псориаза

(19) ЯКю ОПИСАНИЕ ИЭОБРЕТЕНИ ДИАГНОСТИКИ яют содерхан ой моче. При е диагностир повышает точ 3 раза, врем ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Ргосгог М, Б. ей а 1. Е 1 ечагейврегвв.йошпе апй врегвв.пе 1 ече 1 в пСЬе Ыоой ой рвогав 1 в рай 1 епйв.3. 1 пч. 0 егпайо 1., 1975, ч. 65,р. 409-411.Изобретение относится к медицине,в частности к дерматологии, и можетбыть использовано для диагностики псориаза.Цель изобретения - снижение травматичности и повышение точности способа за счет определения содержания полиаминов в суточной моче больного,П р и м е р 1. Из суточной мочи больного В. (1250 мл) 3 мл наливают в ампулу, добавляют равный объем 6 н, НС 1, заливают ампулу и содержимое подвергают гидролизу в течение 16 ч в термостате с температурой15 120 С. 11 араллельно обрабатывают две пробы и соответствующие контрольные пробы с мочой здоровых людей и пробу с Н О. После гидролиза пробы обрабатывают 3 мл н-бутанола, интенсивно встряхивают и центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин. Нижнюю водную Фракцию количественно переносят в бюкс и содержимое при помощи сначала 10 н. ИаОН, а затем О, 1 н. МаОН доводят рН до 10. Добавляют 6 мл н-бутанола и 2 г солевой смеси и встряхивают пробы в течение 2 ч на шюттель-аппарате. Затем пробы переносят в пробирку и центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин, Отбирают при помощи шприца количественно верхнюю бутаноловую фракцию, переносят в фарфоровую чашку, добавляют 2 капли 6 н, НС 1 и выпаривают бутанол на водяной бане. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл 0,1 н. НС 1. В небольшой части этого раствора определяют количественное содержание полиаминов методом электрофореза на бумаге. 25 Для этого 20 мкл полученного раствора переносят при помощи микро- пипетки на полосу хроматографической бумаги (РМ, ИдейегзсЫа 8, ГДР или 45 Ленинградская быстрая) размером 4 см х х 40 см, помещенную предварительно в прибор для электрофореза.Электрофореэ проводят в лимонно- кислом буфере рН 3,6 при напряжении ВО 480 В и силе тока 50-100 мА в течение 40 мин. Электрофореграммы затемо высушивают в термостате при 70 С, обрабатывают нингидриновым красителем (ацетат кадмия, ацетон, нингидрин, концентрированная уксусная кислота, дистиллированная вода), помещают во термостат с температурой 70 С на 20 мин, для проявления окраски. Полиамины обнаруживают на электрофореграмме в виде розовато-фиолетовых пятен, Лля идентификации на электрофореграмме пятен, соответствующих путресцину, спермидину и спермину в исследуемой моче, сравнивают профиль пятен с электрофореграммой стандартных полиаминов. Окрашенные пятна, соответствующие индивидуальным полиаминам, вырезают, мелко нарезают, помещают в пробирки и заливают 5 мл элюирующего раствора (ацетат кадмия, этанол, концентрированная уксусная кислота, дистиллированная вода), Пробирки затем ставят в темное место на 5 мин. Измерение величины поглощения раствора производят на спектрофотометре при длине волны 505 нм. При расчете количества полиаминов учитывают указанные разведения, а также возможные примеси любых аминов в реактивах, для чего проводят контрольный опыт с дистиллированной водой.Относительная ошибка определения 57.Концентрацию полиаминов, содержащуюся в 20 мкл нанесенной на электрофореграмму жидкости, рассчитывают по калибровочным графикам, построенным для каждого амина на спектрофотометре и выражают в миллиграммах в суточной моче.Расчет концентрации индивидуальных полиаминов в суточной моче производят по формулеах 10 х(А3Угде А - количество полиаминов в суточной моче;а - определенная по калибровочному графику концентрацияполиамина в 20 мкл жидкости,использованной для электроФореза, мкг;суточный объем мочи, мл;3 - количество миллилитров мочи,взятое для анализа.Расчет содержания полиаминов всуточной моче,Отсчеты на спектрофотометре, соответствующие отдельным фракциям полиаминов, равны путресцина 0,476,спермидина О, 162 и спермина 0,075.По калибровочному графику находят,что эти данные оптической плотностисоответствуют 4,8 мкг путресцина,2,0 мкг спермидина и 0,87 мкг спер1390567 Формула изобретения 30 риаз. Составитель Н. ВалееваТехред М,Дидык Корректор А, Обручар Редактор Н, Рогулич Заказ 1762/44 Тираж 847 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открывший113035, Москва, Ж, Рвушская наб,д, 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 мина, Умножают эти числа на 10, поскольку сухой остаток растворяют в0,2 мл, а на электрофоретическуюбумагу наносят 20 мкл . Полученныецифры соответствуют содержанию полиаминов в 3 мл мочи, взятой для анализа. Рассчитывают содержание фракцийполиаминов в суточной моче (объеммочи у данного больного составлял1250 мл) по формуле (1): путресцин20,0 мг; спермидин 8,4 мг; спермин3,6 мгСуммарное содержание полиаминов в суточной моче больногоВ,составляет 32,0 мг, что соответствует диагнозу псориаз.П р и м е р 2, Больной Н., 47 лет, Болеет несколько лет (5-6). Обострение около 2-х месяцев; прогрессирующая стадия болезни.Процесс характеризуется не обильными высыпаниями папулезных элементов с локализацией на верхних и нижних конечностях. Папулы розоватого цвета, овальных очертаний с серебристо-белыми чешуйками на поверхности, размером до 2-х копеечной монеты, По периферии папул-венчик гиперемии,Отмечается появление свежих высыпаний, положительный феномен Кебнера,псориатическая триада. Исходнаяконцентрация полиаминов н суточноймоче - 15,72 мгНа 6-7-й день лечения появлениясвежих высыпных элементов не отмечается. Отсутствует венчик гиперемиипо периферии.Использование предложенного способа в медицинской практике позволитповысить точность диагностики псориаза в 2-3 раза по сравнению с извест ным. Способ прост в исполнении, время проведения анализа сокращено с72 до 38 ч. 20Способ диагностики псориаза путемклинического обследования и определения содержания полиаминов в биологической жидкости больного, о т - 25 л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью снижения травматичности и повышения точности способа, определениепроводят в суточной моче и при уровне 15 мг и более диагностируют псо