Способ дзержинской и. и. дифференциальной диагностики острых и хронических воспалительных процессов

(19 0) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАН ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯа ВВтаасаОВу сзидВтйъстВу(71) 2-й Московский ордена Ленинагосударственный медицинский институт им. Н.И.Пирогова(54) СПОСОБ Д 3 ЕРЖИНСКОЙ И. Н. ДИФФЕ.- РЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ОСТРЫХ И ХРО,НИЧЕСКИХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ. (57) Способ дифференциальной диагностики острых н хронических воспалительных процессов путем цитологического исследования костного моэга, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повнаения точности способа при диагностике.урологических заболеваний, пунктат костного мозга разделяют в градиенте фикол-уротраста, выделяют фракцию с плотностью 1,060-1,065 г/л, центрифут гируют 20-40 мин со скоростью 1000 аа 1500 об/мин, далее инкубируют с 2,5-нъм раствором эритроцитов барана, микроскопически определяют число спонтанных розеткробраэукщих клеток и по снижению этого числа в 5-7 раэ относительно норовы диагносцируют хронический воспалительййй процесс, а при увеличении этого числа в 5-9 раэ. относительно нормы диагносцнруютострый воспалительный йрбПесс.Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической биохимии для диагностики острых и хронических воспалительных урологических заболеваний.Известен способ дифференциальной диагностики острых и хронических воспалительных заболеваний путем цитологического исследования костного мозга 1 .Однако известный способ недостаточно специфичен и точен для дифференциальной диагностики урологических заболеваний, поскольку проводят общее цитологическое исследование клеток гранулоцитарного ряда, под-, 15 счет их по морфологическим признакам. Известный способ не позволяет с достаточной достоверностью и точностью определить переход острой формы заболевания в хроническую. 2011 елью изобретения является повышение точности способа при диагностике урологических заболеваний.Поставленная цель - достигается тем, что согласно способу дифферен циальной диагностики и хронических воспалительных процессов путем цитологического исследования костного мозга пунктат костного мозга разделяют в градиенте Фикол-уротрас та, выделяют. фракцию с плотностью 1,060-1,065 г/л, центрифугируют 20-40 мин со скоростью 1000-1500 об/мин, далее инкубируют с 2,5-ным раствором эритроцитов барана (ЭБ), микроскопически определяют число спонтанных розеткообразую-. щих клеток и по снижению этого числа в 5-7 раз относительно нормы диагносцируют хронический воспалительный процесс, а при увеличении этого числа в 5-9 раз относительно нормы диагносцируют острый воспалительный процесс.Способ осуществляют следующим образом. 45У пациента берут пунктат костного мозга.Полученную костно-мозговую жидкость наносят на градиент фикол-уротраста с плотностью 1,090-1,095 г/л, 50 .далее производят отстаивание в течение 30-60 мин, при этом в осадок садятся эритроидные элементы, надо,садочную взвесь с нейтрофильными элементами переносят на четырехсту пенчатый градиент Фикол-уротраста 1,060-1,065 у 1,070-1,075; 1,080- 1,085 1,090-1,095 г/л, центрифугируют 20-40 мин при ОфС со скоростью 1000-1500 об/мин. 60Получают четыре взвеси клеток: промиелоциты образуют кольцо между раствором 1,060-1,065 г/л и костно,мозговой жидкостью, миелоциты - меж,ду растворами 1,070-1,075 и 1,060- 65 Г,065 г/л, юные и палочкоядерные нефтрофилы - между растворами 1,080- 1,085 и 1,060-1, 075 г/л, нейтрофилы сегментоядерные - между растворами с плотностью 1,090-1,095 и 1,080- 1,085 г/л.Соединяют взвесь клеток с плотностью градиента 1,060-1,065 г/лс 2,5-ным раствором эритроцитов барана и инкубацию производят при 0-4 С в течение 10-20 мин, далее осаждают центрифугированием при 0-4 С.П р и м е р 1. Пациент А. Берут пробу костного мозга.В силиконизированную пробирку на 3 мл смеси фикол-уротраста плотностью 1,093 г/л наслаивают 3 мл костно-мозговой жидкости, остаивают 4 мин на льду. Полученную взвесь с нейтрофильными элементами переносят на градиент с плотностью 1,063 г/л, центрифугируют 15 мин при 4 С и 1000 об/мин. Взвесь клеток соединяют с 0,1 мл 2,5-ного раствора ЭБ.Инкубацию осуществляют при 4 С в течение 15 мин, осаждают розеткообразующие клетки центрифугированием 4 С. Фиксируют 3-ным раствором глутарового альдегида, центрифугируют, осадок наносят на предметное стекло, сумат, фиксируют метанолом 4 мин, красят азур-эозином 3 мин,. считают в 6-7 разных полях зрения в иммерсионной системе микроскопа 300 клеток, присоединившиих не менее 3 ЭБ. Абсолютное содержание розеткообразующих клеток рассчитывают по формуле(00 100где Ь - количество костно-мозговыхклеток гранулоцитарного Рядапромиелоцитов, миелоцитов,юных палочкоядерных и сегментоядерных нейрофилов в формуле костного мозга;Р - процент розеткообразующих,клеток;100 1 фОО - показатели, приводящиерезультаты к объему 1 мкл,Пример расчета.В иммерсионной системе микроскопа в 7 разных полях получено 88,0 роэеткообразующих промиелоцитов.Содержание клеточного состава костного мозга в 1 мкл 14300, процентное содержание нейтрофильных элементов костного мозга: промиелоцитовы 0,5.Поставив в формулу цифровые, значения, получают14300 оо о оя 5 1 оо 1 оо1060171 15 11700, 5,0 84 491,4 в 1 мкл,100 100 4100 в 780,39,59 в 1 мкл, 100 100 45 Составитель Н.ХрусталеваРедактор Т.Веселова Техред Т,Маточка Корректор И.Эрдейи Заказ 9899/3 Тираж 713 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, 3-35, Раушская наб., д.4/5Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4 В примере 1 определяли содеря:ание розеткообраэующих клеток у практически здорового человека.П р и м е р 2. Больной Х, история болезни Р 2382, поступил в клинику по поводу фибропластической индурации 5 полового члена. Сопутствующие заболевания - церебральный атеросклероз. Исследование проводят аналогично пример 1; берут градиент фикол-уротраста 1,060 г/л после отстаивания в 10 градиенте 4095 г/л.В исследуемом клеточном составе костного мозга содержание розеткообраэующих клеток следующее: Высокое содержание розеткообразующих клеток говорит об остром воспалительном процессе. Клиническоеисследование подтверждает диагноз.П р и м е р 3. Больной Н,история болезни Р 2056. Поступил вклинику по поводу болезни Пейрони.Показатели крови; (в 1 мкл): лейкоциты 8400, в 1 мкл сегментоядерные .нейтрофилы 4032 (48), палочкоядерные нейтрофилы 252 (3), эозинофилы,924 (11), лимфоциты 2268 (27), моноциты 924 (11). В анализе мочи:белок 0,099, лейкоциты 20-30 в полезрения, оксалаты и много слизи.Пунктаты костного мозга наслаивали на 3 мл смеси фикол-уротрастас плотностью 1,095 г/л в течение З 560 мин на льду.Дальнейшее исследование проводяткак описано в примере 1, толькоградиент фикол-уротраста берут1,065 г/л. 40В исследованном содержимом кост.ного мозга содержание розеткообраэующих клеток следующее: Низкое содержание розеткообраэующих клеток говорит о наличии хроничес кого воспалительного процесса. 50Способ подвергался тщательной проверке. Отработан метод количественного определения спонтанных розеткообразуюших клеток в сравнении с другими способами. Проведен сравнительный анализ на 40 пробах крови клннически здоровых людей и 440 у больных с урологическими заболеваниями.Таким образом, предлагаемыйспособ позволяет дифференцироватьострые и хронические воспалительныепроцессы. При хронических заболеваниях, не поддающихся антибактериальному лечению, количество розеткообразующих спойтанных клеток нейтрофильного ряда в 5-7 раз ниже нормы,при острых - в 5-9 раз выше.Впервые разработанная методикавыделения костно-мозговых предшественников гранулоцитарного ряда может служить для диагностики воспалительных процессов, а также дляизлучения характера изменений даннойпопуляции в организме человека приряде других патологических состояний, в котором участвуют клеткинейтрофильного ряда, а также изменения, связанные с воздействиемна организм человека различных экстремальных воздействий (космические,океанологические исследования), атакже изучение профессиональныхвредностей в различных областях народного хозяйства,Способ найдет широкое применениев гематологической практике, таккак гематопатологические изменения,затрагивающие росток гранулоцитарных клеток, в первую очередь отражаются на популяции клеток, несущихна своей поверхности рецепторы к ЭБ.Впервые получены достоверные показатели розеткообразующих предшественников гранулоцитарного ряда.Полученные данные меняют представление не только о существующихнормах, но и о роли рецепторногоаппарата предшественников гранулоцитарного ряда в организме человека.Способ диагностировать наличиехронического и острого воспалительного процесса при урологическихзаболеваниях позволяет выбратьили провести коррекцию терапии,Правильно подобранная терапия приводит к более быстрому восстановлениютрудоспособности больного за счетсокращения сроков лечения.