Способ определения специфического аллергена при атопической бронхиальной астме

Номер патента: 1335878

Авторы: Величковская, Коркина, Чучалин

ZIP архив

Текст

13358Изобретение относится к медицинеи может быть использовано для диагностики атопической бронхиальнойастмы.Цель изобретения - повышение точности способа эа счет определенияаллергена в составе циркулирующихиммунных комплексов на мононуклеарных клетках методом люминолзависимой хемилюминесценции клеток.Способ осуществляется следующимобразом,Готовят среду для измерения хемилюминесценции, содержащую, мМ: ИаС 1 15110; трис-НС 1 10; глюкозу 7,65; МС 12,5 и люминол 0,65. Последний добавляют в среду для усиления хемилюминесценции,Готовят исследуемый аллерген пу Отем разведения стандартных растворовкоммерческих пылевых и пыльцевых аллергенов в 57.-ном растворе глюкозы всоотношении 1:1000. Конечная концентрация пыльцевых аллергенов 255 р 1 П 3/мл, пылевых аллергенов 10 рИУ/мл,Выделяют мононуклеарные клетки изгепаринизированной крови больного(5 мл крови, 0,1 гепарина) центрифугированием на одноступенчатом градиенте фиколла-верографина плотностью1,077 г/см при 400 8 в течение 40 минс последующим трехкратным отмываниемсредой Р 199 по 10 мин. Конечная концентрация клеток составляет (1,5-2,0)6 3510 млПолучают сыворотку больного из5 мл негепаринизированной крови центрифугированием при 200 д в течение10 минаФормируют иммунные комплексы путемдобавления в 100 мкл сыворотки больного 20 мкл разведенного аллергена,Измеряют хемилюминесценцию в 50 мклсуспензии мононуклеарчых клеток боль 45ного при введении ее в измерительнуюкювету прибора, содержащую 800 мклсреды, После достижения максимумаспонтанной хемилюминесценции и выхода кривой интенсивности свеченияна плато в кювету добавляют 20 мклсыворотки больного с образовавшимисяиммунными комплексами и определяютмаксимум интенсивности свечения активированных мононуклеарных клеток,В качестве контроля проводят измерение хемилюминесценции суспензии мононуклеарнь 1 х клеток того же больного при добавлении аутологичной сыво 78ротки без аллергена, аллергена беэ сыворотки и сыворотки с неспецифическим аллергеном.При анализе результатов за пороговое значение ХЛ-ответа мононуклеарных клеток, активизированных иммунным комплексом (специфическим аллергеном), принимают увеличение интенсивности свечения не менее, чем в 3 раза по сравнению с контролем сыворотки с неспецифическим аллергеном, и не менее, чем в 6 раз по сравнению со спонтанной хемилюминесценцией мононуклеарных клеток больного.Хемилюминесценцию суспензии мононуклеарных клеток измеряют на люминометре 1,КВили люминометре Свет.П р и м е р 1. Больной Д 22 лет. Диагноз: бронхиальная астма, атопическая форма, 1-я стадия, нестойкая ремиссия, бытовая аллергия; обструктивная эмфизема легких.В качестве аллергена использовали растворы пылевых аллергенов сер.153 и 175 в разведении 1."1000, конечная концентрация 10 рИБ/мл, Интенсивность спонтанной хемилюминесценции 50 мкл суспензии мононуклеарных клеток больного составила 16,5-17,1 мВ, хемилюминесценция, индуцированная сывороткой больного с пылевым аллергеном сер. 153, равнялась 36,7 мВ, а с аллергеном сер. 175 повысилась до 134,3 мВ, т.е. в 3,7 раза, превышая уровень спонтанного ХЛ-ответа в 7,9 раз.Заключение: специфический пылевой аллерген сер, 175, сенсибилизация низкая.П р и м е р 2, Больной Г 16 лет, Диагноз: бронхиальная астма, атопическая форма, 1-я стадия, обострение; бытовая аллергия.Использовали растворы пылевых аллергенов сер, 112 и 127 в разведении1:1000, конечная концентрация аллергена 7 рЯ 1/мл. Интенсивность спонтанной хемилюминесценции клеток больного 7,8-7,9 мВ, хемилюминесценция,индуцированная сывороткой больного спылевым аллергеном сер, 112, равнялась 37,2 мВ с аллергеном сер,127повысилась до 295,0 мВ, т.е. в 7,9 раз,превышая спонтанный ХЛ-ответ клетокв 37,3 раз,Составитель М. ВасильевТехред В.Кадар Редактор П. Гереши Корректор И, Муска . Заказ 4042/38 тираж 776ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д.4/5 Подписное Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 з 13358Заключение; специфический аллергендомашней пыли сер. 127, сенсибилизация высокая.П р и м е р 3. БольнойС , 30 лет,Диагноз: бронхиальная астма, атопическая форма, 1-я стадия, легкое течение, стадия нестойкой ремиссии,поллиноз 110Использовали растворы пыльцевых аллергенов ржи и.травы ежа при разведении 1:1000 в концентрации 5 рЯП/мл. Интенсивность спонтанной хемилюминесценции клеток больного 6,9-6,9 мВ, 15 Хемилюминесценция, индуцированная сывороткой больного с аллергеном ржи, 32,0 мВ, с аллергеном травы ежа220,0 шЧ, т.е, вьппе, чем в случае с применением аллергена ржи, в 6,87 20 раз,и выше спонтанной в 31,9 раз. 784Заключение: специфический аллергентравы ежа, сенсибилизация высокая,ф о р м у л а изобретенияСпособ определения специфическогоаллергена при атопической бронхиальной астме путем добавления аллергенак мононуклеарным клеткам крови пациентов с последующим его выявлением,отличающийся тем, что, сцелью повышения точности способа,выявление специфического аллергена ве-,дут с помощью люминолзависимой хемилюминесценции по интенсивности свечениядо и после добавления сыворотки больного, при этом аллерген берутв концентрации 5-10 рИП/мл при соотношении с сывороткой 1:5 и при увеличении свечения в 6 и более раз определяют наличие специфического аллергена,

Смотреть

Заявка

3963241, 16.07.1985

2-Й МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ ИМ. Н. И. ПИРОГОВА

ЧУЧАЛИН АЛЕКСАНДР ГРИГОРЬЕВИЧ, ВЕЛИЧКОВСКАЯ ЕЛЕНА БОРИСОВНА, КОРКИНА ЛЮДМИЛА ГЕОРГИЕВНА

МПК / Метки

МПК: G01N 33/48

Метки: аллергена, астме, атопической, бронхиальной, специфического

Опубликовано: 07.09.1987

Код ссылки

<a href="https://patents.su/3-1335878-sposob-opredeleniya-specificheskogo-allergena-pri-atopicheskojj-bronkhialnojj-astme.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ определения специфического аллергена при атопической бронхиальной астме</a>

Похожие патенты