Способ получения сыворотки плодов животных

,ЯО 4 С 0 5 02 А 61 В 17 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Каттакурганский специализированный комплекс по откорму овец Госагропрома УЗССР и Государственный научноисследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича(56) Авторское свидетельство СССРУ 733603, кл, А 22 В 5/00,А 61 В 17/00, 30,03,78,Авторское свидетельство СССРВ 1089777, кл. А 01 К 62/00, 1983.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЬЗВОРОТКИ ПЛОДОВ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение касается использования продуктов животноводства и направлено на более полное использование отходов производства каракульчи путем получения сыворотки при сохранении целостности шкурки плода. Одновременно с убоем овцематок из околоплодных оболочек через шейку матки извлекают плод. Плацентарное кровообращение сохраняютПережимают пуповиу до появления самостоятельного дыхания. Кровь берут путем пункции правой артерии пуповины при одновременном пережатии левой артерии и непрямом массаже сердца, Отделенная сыво ротка пригодна для культивирования клеток млекопитающих. С обескровленного плода снимают каракульчовую шкурку.13186Изобретение относится к животноводству, а точнее к использованиюпродуктов животноводства в биотехнологии,Цель изобретения " получение максимальиого количества сыворотки, пригодной для культивирования клетокмлекопитающих, при одновременномсохранении целостности шкурки плода.П р и м е р 1. На конвейер мясо 10комбината подается группа (500-1000голов) суягных овцематок со срокомбеременности 130-135 дн. На конвейере при убое овцы одновременно черезразрез белой линии ее брюшины отделяют плод со всеми околоплодными оболочками и сразу перекладывают на специальный стол-конвейер, где без какой-либо задержки вскрывают околоплодный пузырь, и синхронно сокращению стенок матки на стол вытягиваются через шейку матки плод и его пуповину без нарушения плацентарного кровообращения плода. В целях увеличениязабора плодной крови искусственно25включают у плода легочный круг кровообращения, путем пережатия на несколько секунд (10-15) всех сосудовпуповины до появления у него самостоя.тельного дыхания. Забор крови делаютпри полном дыхании плода из правойпуповочной артерии, идущей от плодак плаценте, при этом левая вена и левая артерия пуповины плода зажимаются хирургическими зажимами. Забор 35крови производят: иглой "И" с дренажным устройством в стерильные сосуды, заполненные азотом.В дальнейшем из собранной плоднойкрови выделяют и хранят фетальную 40сыворотку по общепринятой технологии,а обескровленный плод затем поступает в сырьевой цех для снятия с негокаракульчовой шкурки.П р и м е р 2, На конвейер камбината подают овцематку каракульскойпороды суягности 130-135 дней и после ее забоя помещают на операционныйстол. Оператор вскрывает овцематку,а затем околоплодный пузырь, не нарушая целостности пуповины, В такт сокращениям матки осторожно вытягиваютголову плода из пузыря,Второй оператор освобождает наружные дыхательныепути от слизи и для включения дыхания и легочного кровообращения у плода зажимает рукой все сосуды пуповины примерно на 10-15 с, до появления 13 2первого вздоха. Третий оператор зажимает на расстоянии 4-5 см от пупочнаго кольца левую вену, по которой кровь идет от плода к плаценте, четвертый обрабатывает правую пульсирую" щую артерию 5-107-ным раствором иода, пятый подставляет под правую артерию резиновый турникет и слегка натягивает сосуд, шестой вводит в артерию иг" лу и через дренаж осуществляет забор крови в стерильный стеклянный флакон, заполненный азотом, По окончании процесса обескровливания плод поступает для снятия шкурки а флаконы с кровью после 2-3-часового выдерживания при комнатной температуре помещают в холодильник при 8 С на 12 ч, послечего сыворотку, отделившуюся от сгустка, отсасывают во флаконы в асептических условиях, замораживают и храонят при -10 С.МП р и м е р 3, Применение сыворотки плодов овец 130-дневного возраста для культивирования клеток фибробластов куриных эмбрионов.Куриный эмбрион 9-дневного возраста извлекают в стерильную чашку Петри, где удаляют глаза, клюв, лапы и крылья. Оставшуюся тушку промываютв трех сменах раствора Хенкса и измельчают на кусочки, равные примерно3 мм в поперечнике, Измельченнуюткань снова промывают в трех сменахраствора Хенкса и переносят в коническую колбу для трипсинизации, В колбудобавляют 0,257,-ный раствор трипсина в растворе Хенкса (200 мл на 5-10 эмбрионов), а затем помещают в цилиндрический магнит и на магнитноймешалке перемешивают суспензию в течение 1 ч при комнатной температуре,Затем клетки осаждают центрифугированием (10 мин при 600 об/мин), промывают в растворе Хенкса, вторично центрифугируют и суспендируют в ростовой среде следующего состава: сыворотка плодов овец 130-дневного срокабеременности 103 и 05 Х-ный гидролизат лактальбумина на растворе Хенкса 907,Посевная доза составляет 500000 клеток/мл на пробирку, куда разливают по 2,0 мл суспензии, При культивировании клеток монослой сформируется на 2-е сутки,П р и м е р 4Условия те же, что в примере 2, но используют только сыСоставитель А,СемионовТехред М.Моргентал Корректор И.Муска Редактор В.Петраш 2479/22 Тираж 499 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Заказ Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 3 13 воротку плодов овец 135-дневной беременности.П р и м е р 5. Применение сыворотки плодов овец 132-дневного возраста для культивирования клеток СПЭВ (перевиваемая культура почки эмбриона свиньи).9 мл взвеси клеток СПЭВ при посевной дозе 100000 клеток(мл вносят вой флакон с рабочей поверхностью 20 см Питательной средой служит среда - 0,53-ный . гидролизат лактальбумина в растворе Хенкса, рН 7,6. Клетки помещают в термостате при 37 С. Сыворотку плодов овец 132-дневного возраста 1 ОХ-ной концентрации в среде 199 добавляют во флакон с клетками на 3-4-е сутки, Контролируют рост клеток при световом микроскопировании, и по мере формирования сплошного монослоя используют для репродукции вирусов.Испытание сыворотки крови плодов овец каракульской породы на ряде других клеточных линий показывает, что 18613 4она вполне может заменить дефицитную фетальную сыворотку крупного рогатого скота, помимо того, источник ее практически неисчерпаем, так как получае ся она из отходов производства каракульчи.формула изобретения 10 Способ получения сыворотки плодов животных, включающий забой беременного животного, извлечение плода, его обработку, отбор крови и отделение сыворотки, о т л и ч а ю щ и й15 с я тем, что, с целью получения сыворотки при сохранении целостности шкурки плода, из животных используют овец, плод извлекают иэ околоплодных оболочек через шейку матки, сохраняя 20 плацентарное кровообращение, пережимают пуповину до появления самостоятельного дыхания и берут кровь путем пункции правой артерии пуповины при одновременном пережатии левой 25 артерии с левой веной и непрямоммассаже сердца.