Способ дифференциации пятен крови плодов и детей до пяти недель от крови взрослых людей

/00 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ ИЯ 1 юл. 95кая, Л.С,Ф ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР.ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(71) Горьковский государственный медицинский институт им. С,М,Кирова (53) 615.777/779(088.8)(56) 1. Федоровцева Л.С, и Белихина Н.В, К определению фетального гемоглобина в следах крови на вещественных доказательствах. - В сбо никеВопросы судебно-медицинской экспертизы и криминалистики. Под ред. А.П,Загрядской, Горький, 1979, с. 81-83.2. Шевчук В.А. Дифференциация крови плода и взрослого человека по гемоглобину фетального типа в судебно-медицинском отношении. Автореф. канд. дис.(54) (57) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПЯТЕНКРОВИ ПЛОДОВ И ДЕТЕЙ ДО ПЯТИ НЕДЕЛЬОТ КРОВИ ВЗРОСЛЫХ Л 10 ДЕЙ путем растворения пятен крови в дистиллированной воде и последуюшего фотоэлектроколориметрирования, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью обеспечения возможности исследования пятенкрови различного срока давности, определяют содержание гемоглобина А врастворе лимонной кислоты и при содержании его от 0,1 до 752 диагностируют кровь взрослого, при содержанииот 80 до 1003 диагностируют кровьплода или ребенка до пяти недель, 113812Изобретение относится к медицине, а именно к судебной медицине, и может быть использовано для установления наличия крови плодов, новорожденных и детей до пяти недель в пятнах на вещественных доказательствах.Особенности молекулярной структуры гемоглобина взрослого человека (НвА) и Фетального гемоглобина (НвР) были положены в основу ряда способов, 1 О позволяющих определять наличие НвА и НвУ как в свежей жидкой крови, так н в пятнах крови на различных предметах; электрофорез в различных средах, иммунологический анализ, цитологический способ, реакция щелочной денатурации и др.Известен способ дифференциации пя" тен крови плодов и детей до пяти недель от крови взрослых людей, заклю чающийся в том, что изучению подвергают одновременно две вытяжки: из пятна крови новорожденного и из пятна крови взрослого человека, которые наносят на предметные стекла, высу шивают, Фиксируют и помещают в цитратно-фосфатный буфер. При этом кровь взрослого человека полностью элюриует в раствор, а кровь новорожденного остается на предметном ЗО стекле 11.Наиб.лее близким к предложенному по технической сущности является способ дифференциации пятен крови плодов и детей до пяти недель от взрос 35 лых людей, основанный ца обработке вытяжки крови щелочью и процентном подсчете Фетального гемоглобина с помощью Фотоэлектроколориметра 12).Однако известные способы опреде ления можно иснодьэовать лишь при анализе свежей (,негемолиэироваиной) жидкой крови. Целью.изобретения является обеспечение возможности исследования пятен крови различного срока давности,Поставленная цель достигается тем, что согласно способу дифференциации пятен крови плодов и детей до пяти недель от крови взрослых людей путем 50 растворения пятен крови в дистиллированной воде и последующего фотоэлектроколориметрирования; определяют содержание гемоглобина А в растворе лимонной кислоты и при содержании его 55 от О,1 до 753 диагностируют кровь взрослого, а при содержании от 80 до 1003 диагностируют кровь плода,новорожденного или ребенка до пяти недель.Способ осуществляется следующим образом,Из исследуемого пятна, а также из заведомо известных пятен крови новорожденного (плода или ребенка до пяти недель) и взрослого человека вырезают по два кусочка с одииаковым весом сухого вещества крови (по 25 мг). По одному кусочку иэ каждого объекта помещают в отдельные пробирки с 5 мп дистиллированной воды и оценивают степень растворимости пятен по интенсивности окраски растворов, используя фотоэлектроколориметр ФЭК-М 1,светофильтр синий, кювета 5 мм ). При условии получения коэффициента светопропускания растворов от 0 до 503 исследуемые пятна берутся в работу.Аналогичные навески фиксируют 80 -ным этиловым спиртом в течениеч, высушивают и помещают в пробирки с 5 мл раствора лимонной кислоты (рН 2,8). Через несколько часов раствор кислоты с навеской крови взрослого человека окрашивается в красно- бурый цвет, раствор кислоты с навеской новорожденного остается прозрачным или окрашивается слабо. Количественная оценка результатов прово дится через 24 ч на фотоэлектроколо риметре путем определения коэффициента светопропускания растворов: изменение окраски растворов в пределах 0,1-757 свидетельствует о наличии в пятне крови взрослого человека, в пределах 80-1007. - крови плода, новорожденного или ребенка до пяти недель.1П р и м е р 1. Обнаружен труп новорожденного ребенка. При осмотре места происшествия произведены смывы пятен, похожих на кровь, на ватные тампоны.Пятна на тампонах исследованы судебно-медицинским экспертом и уста новлена кровь человека 0 сд группы. Для сравнительного исследования представлены высушенные на марле образны крови Пятаевой Т.Н. и ее ново, рожденного ребенка. Вырезали по два кусочка иэ пятен крови с каждого ват ного тампона (объекты 1 и 2), а также из образцов крови новорожденного и Пятаевой, которые брались в качест" ве контроля (вес сухого вещества крови по 25 мг ). По одной навеске с каждого объекта помещали в пробиркиЭ 11381с 5 мл дистиллированной воды, анапо"гичные навески фиксировали 80 -нымоэтанолом в течение 1 ч, подсушивали.на воздухе и помещали каждый кусочекотдельно в 5 мп раствора лимоннойкислоты ( рН 2,8). Через 4 ч растворкислоты с образцом крови Пятаевойприобрел интенсивный красно-бурыйцвет, растворы кислоты с кусочкамипятен из объектов 1 и 2 и образцом 1 Окрови новорожденного остались практически бесцветными, Результаты ко-,личественной оценки и определениекоэффициента светопропускания растворов приведены в табл.1. 15Таким образом, в пятнах на двухватных тампонах обнаружена кровь, которая принадлежит плоду, новорожденному или ребенку до пяти недельи не может принадлежать взрослому 20человеку,В табл.2 приведены значения коэффициента светопропускания растворовв пятнах крови новорожденных и взрос"лых различной давности в дистиллированной воде и в растворе лимоннойкислоты (рН 2,8)..Исследовали одно пятно крови намарне давностьв 1 мес. В качествекоитроля использовались пятна заве-.домо известной крови новорожденного.(пуповинная ) и взрослого человекатакой же давности, Вырезали по двенавески (содержащих по 25 мг сухоговещества крови) из каждого пятна.Одна навеска помещалась в пробирку35с 5 мл дистиллированной воды, другая(аналогичная ) фиксировалась 80 с-нымэтиловым спиртом, высушивалась ипомещалась в пробирку с 5 мп раствора лимонной кислоты (рН 2,8 ).40Количественная оценка результатовпроводилась через 24 ч от моментаначала реакции на фотоэлектроколориметре марки ФЭК-И,45В табл, 3 представлены значенияКСР общего гемоглобина в дистиллированной воде и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты.1Таким образом, в исследуемом пятие содержится кровь взрослого человека,П р и м е р 3. Исследовали однопятно крови на марле давностьюодин год. В качестве контроля использовались пятна заведомо извест-,ной крови новорожденного (пуповинная)и взрослого человека той же давности. 25 4Техника исполнения аналогична описанной,В табл. 4 представлены значения.КСР общего Нв в дистиллированной во-.де и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты.Таким образом, в исследуемом пятне содержится кровь взрослого человека.П р и м е р 4. Исследовали однопятно кровина марледавностью 1 мес,Вкачестве контроляиспользовались пятназаведомо известной крови новорожденного (пуповинная ) и взрослого человека такой же давности. Техника исполнения аналогична описанной.В табл.5 представлены значенияКСР общего Нв в дистиллированной воде и гемоглобина А в растворе лимонной киспотыТаким образом, в исследуемом пятне содержится кровь плода ипи ребенка до пяти недель.П р и м е р 5, Исследовали однопятно крови давностью один год, В качестве контроля использовали пятназаведомо известной крови новорожденного (пуповииная) и взрослого человека такой же давности. Техника исполнения аналогична описанной,В табл. 6 представлены значенияКСР общего Нв в дистиллированной воде и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты,Таким образом, в исследуемом пятне содержится кровь плода или новорожденного ребенка в возрасте допяти недель.. П р и м е р 6. Исследовали двапятна крови (новорожденного и взрослого) с плохой растворимостью вдистиллированной воде (КСР свыше 503),Техника исполнения аналогична описанной.В табл.7 представлены значенияКСР общего Нв в дистиллированной воде и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты,Таким образом, плохо растворимые пятна брать в работу (исследовать в растворе лимонной кислоты ) нельзя. В этом случае пятно крови взрослого дает такие же показания КСР НвА в лимонной кислоте (по которым высказывается суждение о принадлежности крови новорожденному ипи взрослОму человеку), как и пятно кропи новорож1138125 Таблица 1 Исследуемыеобъекты Кровь новорожденного ровь Пятаевой Т.Н.бъект бъект ц а 2 Т а авность храния пят 1 день - Зме3 мес. 1 день 0,1-25-35 ВЮ 7 б мес. 1 день9 мес. 0-5 80-00 40-7 день мес2 ме 5 00 50-72 Свыве года 5 лет 15-50 5-100 55 денного, т,е. дифференцирование пятен невозможно.В пределах растворимости в дистиллированной воде от 0,1 до 503 пятна крови новорожденных и взрослых могут дать одинаковые значения КСР, НвА - : в пределах от 7 б до 79%.П р и м е р 7. Исследовали два пятна крови: новорожденного давностью 1 мес, и взрослого давностью 6 мес, Техника исполнения аналогична описаннойВ табл.8 представлены значения КСР общего Нв в дистиллированной воде и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты. Таким образом, пятно могло прои зойти как за счет крови новорожденного ( плода), так и за счет кровивзрослого человека, Это объясняетсятем, что полученные значения ( 773)входят в группу сомнительных значе О ний ( КСР 76-793)Предлагаемый способ позволяетопределить возможность исследования,пятен крови различного срока давности.0 Исслед Контрол взросло 0,01 а 0,01 4 Табл 5 б 0 аблиц 0 0,1 0,0 0,01 О едуемое пят Контроль взрослого ч 5 Контрольноворожден 0 ое пятно- кровьчеловек Контроль - кровьворожденного Исследуемое пятноКонтроль - кровьвзрослого человек Контроль - кровьноворожденного Исследуемое пятно Контроль кровь взрослого человек Контролькровьноворожденного ровьловекровьго 1138125 8Таблица 310 1138125 чч Таблица 7 Исследуемое пятно крови новорожденн 9 Исследуемое пятикрови взрослого 8 абл Исследуемое пятно крови новорожденн 7 ое пятноослого сслед рови оставитель В,фролова ехред И. Надь Ко,Лугов актор Л.Гра рек аказ 10583/ Тираж 722 Подо НИИПИ Государственного комитета .С по делам изобретений и открытий 3035, Иосква, Ж, Раушская иаб., д, исноеССР филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная,