Способ определения серотонина и гистамина в биологических объектах

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 29016 1 И 335 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ Е ИЗОБРЕТЕНИЯВИДЕТЕЛЬСТВУ О САН АВТОРСКОМ 4 л м В 6ицинсЕ,Е.Я инстико 8)В. и др. - Лаборатор, с. 104-107.ЕЛЕНИЯ СЕРОТОНИНА ЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ относится к клиничецелью повышения чув Ь(54) СПОСОБ ОПРЕДИ ГИСТАИИНА В БИО(57) Изобретениеской биохимии. С ствительности и упрощения определениясеротонина и гистамина навеску биологического материала гомогениэируют,центрифугируют. Супернатант и контрольные растворы серотонина, гистамина наносят на пластину с силуфолом ихроматографируют в системе этанол -уксусная кислота - вода (5:3:2). Пластины сушат, проявляют 3-53-ным раствором аллоксана в диметилформамиде,нагревают 3-5 мин при 100-105 С. Участки хроматограмм элюируют диметилформамидом и спектрофотометрируют.Д 0 000261Содержание серотонина =Д,Содержание гистаминаД 0 000363Д, где Д - оптическая плотность анализируемых растворов,Д - оптическая плотность стандартных растворов.Получили результатыД,сер. = 0,333.Д сер. = 0,204.Д,гист, = 0,469.Д гист. = 0,046. 02040000261-бСодержание гистамина - - в в - ---- 35 6 "10 мкг/г.0,4691П р и м е р 2, Количественное оп- наносят на пластины силуфола поределение серотонина и гистамина в ,0,04 мл стандартных растворов серокрови. Из пальца набирают 0,1 мл кро- тонина и гистамина.ви и переносят в пробирку с 0,2 мл Расчет количественного содержания,0,4 н,НС 10, Пробу центрифугируют в 50 серотонина и гистамина в крови провотечение 30 мин при 3000 об/мин. На дят по формуламД 0 00003913линию старта пластины силуфола нано- Содержание серотонина = - - - --- ,сят 0,04 мл надосадочной жидкостиои два пятна стандартных растворов Содержание гистаминаД 0 00005445серотонина и гистамина. Дальнейшие 55 Получали результатыооперации те же, что в примере 1, за , Д сер. = 0,140.исключением того, что используют 5%- Д сер. = 0,273ный раствор аллоксана в ДМФА, нагре- Дгист, = 0,197,вают 5 мин при 105 С. Параллельно Д гист. = 0,193. 1 129016Изобретение относится к клинической медицине и может быть использовано в клинических биохимических лабораториях.Цель изобретения - повышение чув ствительности и упрощение способа за счет использования цветореагента аллоксана.Способ осуществляют следующим образом, 10Навеску исследуемого биологического материала гомогенизируют, центрифугируют, супернатант и стандартные растворы серотонина и гистамина наносят на пластину с силуфолом и прово дят хроматографию в системе растворителей этанол:уксусная кислота:вода 5:3:2. После этого пластины высушивают, проявляют 3-5 .-ным раствором аллоксана в диметилформамиде, нагре вают 3-5 мин при 100-105 С, элюируют проявленные участки диметилформамидом, спектрофотометрируют И рассчитывают содержание серотонина и гистамина, 25П р и м е р 1. Навеску ткани 50 мг тщательно гомогенизируют в 1 мл дважды дистиллированной воды. Гомогенат. центрифугируют в течение 30 мин при 3000 об/мин, На линию старта пластины 30 силуфола УФ 254 наносят 5 пятен надосадочной жидкости (0,03 мл) и два пятна О, 1 стандартных растворов серотонина - креатинин сульфата и гистамина дигидрохлорида. Хроматограммы помещают в систему растворителей этанол - уксусная кислота - вода (5:3:2). После прохождения раствори-, телем 10-11 см пластины вынимают, высушивают и проявляют З .-ным раствором 40 7 2аллоксана в диметилформамиде (ДМФА) с последующим нагреванием в сушильном шкафу при 100 С в течение 3 мин. Окрашенные пятна соскабливают, переносят в отдельные пробирки и в каждую из них добавляют 3 мл ДМФА. Со- держимое пробирок нагревают в кипящей водяной бане в течение 3 мин, охлаждают и переносят в кюветы толщиной слоя 1 см для спектрофотометрирования. Параллельно наносят на пластины силуфола по 0,03 мл стандартных растворов серотонина и гистамина и проводят те же манипуляции. Для спектрофотометрирования контролем является опыт с соскобом сорбента. Измерение оптической плотности анализируемых проб и стандартных растворов проводят на фоне контроля при помощи спектрофотометра при 470 нм для серотонина и 465 нм для гистамина..Расчет количественного содержания серотонина и гистамина в гомогенате ткани (в мкг/г ткани) проводят по формулам .-сСодержание гистамина - д0,197- 53,34 10 мкг/мл. П р и м е р 3. Количественное определение серотонина и гистамина в гомогенате ткани проводят так же, как. в примере 1, но с использованием 47- ного раствора аллоксана в ДМФА и вре 1 О мени нагревания 4 мин при 103 С,Получали результатыД сер. = 0,330,Д сер. - 0,202.Дгист. = 0,468.,Д гист. = 0,045. 0 202 0 000261Содержание серотонина0,330159 76 10 мкг/г. Составитель Н. ГуляеваТехред Л.Сердюкова Корректор С.Шекмар Редактор А Ревин Заказ 7893/39 Тираж 798 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 Од 045 Од 000363 -бСодержание гистамина - 0 4 - 35,12 10 мкг/г.а и з о б р е т е н и я способа, пробу наносят на пластину с Формула и з оСпособ определения серотонина и силуфолом, проводят разделение серогистамина вина в биологических объектах 20 тонина и гистамина тонкослойной хропутем о ра откибработки биологической пробы матографией, пластины обрабатывают химическим реагентом и разделения 3-5 Е-ным раствором аллоксана в димесеротонина и гистамина с последующим тилформамиде, затем выдерживают спектрофотометрированием, о т л и ч а-5 мин при 100-105 С, а проявленныей с я тем что с целью упро участки хроматограмм элюируют диме- щения и повышения чувствительности тилформамидом.