Способ определения гликогена в тканях животных

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ЯО 27070 1 М 33 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ТЕЛЬСТ ВТОРСКОМУ КеЛп Ы использовано при определении на в тканях животных. Цель из ния - повышение точности и у способа, Пробы измельчают, с ют с этанолом и подогревают. занной смеси добавляют щелоч ролиз проводят на кипящей бан тем ткани охлаждают, добавляю ловый спирт и смесь центрифуг ликог брете скорени мешива- К укаь. ГидательЗа эти рую т в е мяс 1960,Осадок раствор серной кислоте ду антроновый щают в кипящую охлаждения сме хо(57) Изобмясной пр ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛИ ЖИВОТНЫХтение относится ппленности и мо л ли бластибыть счеты провод вочной криво ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ,М.: Пищевая промышленность,с. 253-254. ют, нейтрализуюи добавляют наеактив Смесьводяную баню.ь колориметрирт на основании2 табл.1 12707Изобретение относится к мясной промышленности и может быть использо" вано при определении гликогена в тка нях животных на мясокомбинате, мясоконтрольных станциях, ветеринарных лабораториях.Цель изобретения - повышение точности и ускорение процесса исследования путем предварительной фиксации ткани этанолом и проведения гидроли. за раствором гидроксида калия и этанолом.Способ осуществляется следующим образом.Отобранные пробы фиксируют, для 15 чего их измельчают и смешивают с 96% этанолом в соотношении 1:2-1:5.Смесь подогревают 2-3 раза до кипения,В таком виде материал может храниться несколько суток, при этом ко" 20 личество гликогена не снижается.У указанной смеси добавляют 30%-ный КОН при соотношении ткани, спирта и щелочи 1;(2-5):(6-12), Гидролиз проводят на кипящей водяной ба 04 2тканей). Затем добавляют 3 мл дистиллированной воды, несколько капельконцентрированной серной кислоты и10 мл этанола 96 . Затем центрифугируют в течение 30 мин при 2500 об/мин.Надосадочную жидкость сливают, Полученный осадок после высушивания растворяют в 5 мл горячей дистиллированной воды, нейтрализуют серной кислотой и добавляют 20 мл антроновогореактива (0,2 -ный раствор антрона всерной концентрированной кислоте).После чего пробирки помещают в водяную баню и кипятят в течение 10 мин,затем охлаждают до комнатной температуры. Содержимое колориметрируют наФЭКе с красным светофильтром (620 нм).Расчет проводят на основании калиб"ровочной кривой, построенной по стандартным растворам глюкозы, умножаяполученное количество на коэффициент0,9,Результаты приведены в табл. 1Таблица 1не в течение 10-20 мин. После растворения ткани пробы охлаждают до комнатной температуры и добавляют этиловый спирт, затем центрифугируют в течение 30 мин при 2000 об/мин. 3Надосадочную жидкость сливают. Осадок гликогена при необходимости переосаждают спиртом. Затем осадок .растворяют в горячей дистиллированной воде, нейтрализуют в серной кислоте и добавляют на холоду антроновый реактив. Смесь помещают на 10 мин в кипящую водяную баню, после чего ох.лаждают до комнатной температуры и колориметрируют на ФЗКе с красным 4 светофильтром (620 нм).Расчеты проводят на основании ка". либровочной кривой, построенной постандартным растворам глюкозы, умножая полученное количество на коэффициент 0,9.П р и м е р 1. Навески мышц и печени по 1 г вносят в центрифужные пробирки и приливают 3 мл 96 этанола, Смесь подогревают до кипения. Зафиксированные таким образом пробы доставляют в лабораторию для дальнейших исследований.После чего к указанной смеси добавляют 7 мл 30 -ного водного раствора гидроксида калия и проводят. гидролиз на кипящей водяной бане в течение 15 мин (до полного растворенияУбой свинейна мясокомбиУбой свинейв хозяйствебез транспортировки Содержани гликогенанате с предварительной транспортировкой на 100 км 0,50+49) 12 103,04+24)01 7,22+197,46 243,18+27,7 в мышцах в печен идетельстуш свиней т количеПолученные результаты с0 вуют, что транспортировка на расстояние 100 км снижа ство гликогена,Предлагаемый ускоренный ме Р оличества гликоген д оп позеделения к олягт прои одить систематически контр ль за содержанием гликогена и о ровать качество получаемой про ы ь про сть сох 55 сР дукции.Для исследований отбирали пробна мясокомбинате. Сразу же частфиксировали согласно пред а аемогоспособа, а другую ча ранялипри 3-4 С.Количество гликогена определялиазу же после отбора проб и через6 и 24 ч предлагаемым способом и ивестным.Результаты приведены в табл. 2.1270704 4Таблица 2 Количество гликогена Время исследования известный (контроль) предлагаемый(опыт) 212,6+20,6 210, 3+19, 5 208,0+ 14,6 188,3+40, 1 126,5+22,7 48,7+18,4 После отбора пробЧерез 6 чЧерез 24 ч Составитель Л. Шилина Техред И. Попович Корректор Е. Сирохман Редактор Н. Киштулинец Заказ 6238/48 Тираж 778 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Полученные результаты исследования показали, что предлагаемый способ15 повышает достоверность количественного определения гликогена в тканях, так как устраняет потери гликогена в период доставки материала для исследования и сокращает время исследования эа счет ускорения гидролиэа с 2-х и более часов до 10-20 мин.Метод доступен для выполнения в производственной лаборатории и может быть рекомендован для широкого приме 25 нения.формула изобретенияСпособ определения гликогена в тканях животных путем щелочного гидролиза ткани, осаждения гликогенаспиртом, растворения осадка, нейтрализации и обработки его растворомантрона с последующей колориметрией,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью повышения точности и ускоренияпроцесса исследования, ткань предва-рительно фиксируют этанолом в соотношении ткани и этанола (1:2)-(1:5),подогревают до кипения, а гидролиэпроводят 25-353-ным раствором гидроксида калия и этанолом в соотношении ткани , этанола и гицрооксида калия 1:(2-5):(6-12) в течение 6-20 мин.