Способ получения -изолейцина

(51)4 С 12 Р 13 06 БРЕТЕНИИДЕ 7 ВЪФТВУ чаю- бонусреду в.мл е аз ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬПЮ ОПИСАНИЕ Н АВТОРСКОМУ СВ(71) Казанский ордена Трудового Краного Знамени химико-технологическийинститут им.С.М.Кирова и Фрунзенскизавод антибиотиков(56) Авторское свидетельство СССРУ 943282, кл, С 12 Р 13/08, 1982.Ргдшагу Ргойцсгз оГ МегаЬо 1 дзш.Ед Ъу А.Н.йоге, С.Ашдпо. АсЫ Есошоп 1 с М 1 сгоЬ 1 о 1 оду, 1978, 2, р.232. О., 1206305(54) (57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Ь-ИЗОЛЕИЦИНА путем культивирования продуцирующих его микроорганизмов Вгеч. - Ьасгегшш Ь 1 ачшв в условиях аэрации на питательной среде,содержащей / углеводы, источник азота, минеральные соли и стимулятор роста, о т - л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода Ь-изолейцина, в качестве стимулятора роста используют дезоксирибонуклеазу.2. Способ по п.1, о т л и ,щ и й с я тем, что дезоксири кле у вносят в питательную количестве 1 10 -1.10 мг/12063 Изобретение относится к микробиологической промышленности, к производству:аминокислот, а именно к способам получения Ь-изолейцина.Цель изобретения - повышение выхо да Ь-изолейцина.Введение в качестве стимулятора роста деэоксирибонуклеазы в концентрациях, близких.к концентрации ферментов, находящихся в живой клет О ке, приводит к ускорению синтеза ДНК и связанного с этим процессом деления клеток, что положительным образом сказывается на росте и развитии всей клеточной популяции микроорганизма 15 продуцента и синтезе аминокислоты.П р и м е р 1. Односуточную куль туру штамма ВгечдЬасгегимп Е 1 ачпш ВНИИГенетика 10-89, выращенную на косяках с агаром Хоттингера, переме" щают в колбы Зрленмейера емкостью ,750 мл, содержащие 100 мл питательной среды следующего состава, г/л:,Содержание Ь-иэолейцина в культуральной жидкости определяют методом 2 О тонкослойной хроматографии на пластинах Яг 1 пГо 1 после раэгонки в течение 40 мин в системе растворителей: изопропанол, ацетон, 28%-ный водный раствор аммиака, вода в соотношении 25 50:50: 12,8, и обработки 1%-ным раст.вором нингидрина в ацетоне.Полученные данные приведены втаблице . ЛКак видно из таблицы, оптимальными являются концентрации дезоксирибонуклеазы 1 10 -110мг/мл сре-ды. При внесении в ферментационнуюсреду стимулятора в этих концентрациях наблюдается увеличение концентрации Ь-изолейцина на 25-29% посравнению с контролем, по сравнениюс известным способом наблюдаетсяувеличение выхода аминокислоты на3,9 г/л (по известному способу О получено 14,5 г/л Ь-изолейцина, попредлагаемому 18, 1 г/л). Концентрация ДНК-аэы, мг/мл 10 10 10 10 10 3 Контроль Показатели Концентрацияизолейцинана 72 чроста, г/л 14,0 14,6 18,1 14,8 14,0 Стимуляцияк контролю,% 5,7 25,7 29,3 4,3 Меласса 30Кукурузныйэкстракт 30ИНФ С 1 4ВодопроводнаяводаОстальноегрН "реды доводят 40%-ным раствором ЫаОН до 7,3-7,5.Колбы вместе со средой предварительно стерилизуют в автоклаве при 1,0 атм в течение 40 мин.После засева культуры колбы устанавливают на круговую качалку со скоростью 200-220 об/мин и выращивают посевной материал 16-18 ч при 30 С.Готовый посевной материал вносят в количестве 6,6% (по .объему) в кол 05 2бы Эрленмейера емкостью 750 мл, содержащие 30 мп ферментационной среды,содержащей сахар кубинский, (МБ 4) 80,КН РОМ 8807 НО, мел, дестибиотйн,тиамин и водопроводную воду", Ферментационную среду стерилизуют,одновременно с инокулятом в ферментационную среду вносят дезоксирибонуклеазу в концентрациях 110 з 110 мг/мл. Ферментацию проводят,на круговой качалке со скоростью200-220 об/мин при 30 С в течение72 ч. Контролем служат клетки Вгеч"Ьасегыш Е 1 ачцш 10-89, культивируемые в аналогичных условиях без добавления деэоксирибонуклеазы.1206305 Поополжение таблицы Концентрация ДНК-азы, мг/мл 10 101 О 10 Показатели 10 Контроль 0,0863 0,0822 Стимуляция к контролю, 7 4,1 1,2 6,3 12,3 5,03 Коэффициент конверсии,Ж 17,6 16,1 18,9 16,3 15,3 Стимуляцияк контролюдо коэффициенту конверсии, Х 5,2 15,7 23,5 Составитель Н.Афанасьева Редактор Н.Яцола Техред З.Палий Корректор С. ШекмарЗаказ 8651/26 Тираж 490 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Рауаская наб., д.4/5