Штамм вируса алма-арасан n каз-1380 кл, используемый для получения диагностических препаратов

(1) 11 А 61 К 39/42 12 М ОБ ПИ АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 5/28-1 юл. Р 36 С.К.Кар омашевскв, Т.В.Кии Н,И,Дро-. ьскии инст едоват ели, микрезней иД.И.Ива76.8.09 ологии,иститутского.8) СУДАРСТНЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(53) 615,373,3,(54) ШТАКЧ ВИРУСА АЛМА-АРАСАН У КАЗ 1380 КЛ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ.(57) Штамм Алма-Арасан У Казкл,ГКВ к 675 (Государственная коллекция вирусов Института вирусологииим. Д.И.Ивановского), используемьйдля получения диагностических препаратов.Изобретение относится к вирусоло-гии, в частности к производству вакционно-сывороточных препаратов,Целью изобретения является получение нового штамма неизвестного ранее:арбовируса, пригодного для производства специфических диагностическихпрепаратов.Морфологические признаки, Прифиль. рации вирусосодержащей суспенэии через миллипоровые фильтры размером 100 и 50 нм снижения инфекционного титра не наблюдалось. Обработкавирусосодержащей мозговой суспензии,дезоксихолатом натрия приводит с сни жению титра вируса на 4,8 1 Р, Этосвидетельствует о том, что вирусимеет размеры в пределах до 50 нми содержит липосодержащую оболочку.При обработке БУДРом титр вирусане снижался, что является косвеннымдоказательством о принадлежностиего к РНК-содержащим вирусам.На основании морфологических, морфогенетических и антигенных признаков изолированный вирус отнесен к семейству Тогавириде, роду флавивирус,антигенной группе В,Культуральные свойства. Размножается в культуре клеток СПЭВ без цитопатического действия. Титр вируса30в культуральной жидкости при титровании на мышах равен 4,2 1 о Ы)50/0,02 мл,Адаптационные свойства. Исходныйвирус выделен от клещей 1 ходез регвп 1 са 1 пв и адаптирован к организму1-2-дневных белых мышей, прошел 7пасажей. Инкубационный период составил 7 дней при первичном выделениии сократился до 3-4 дней в последующих пассажах. Инфекционный титр вируса для новорожденных белых мышейпри мозговом заражении достигает8,0 1 я ЬВ 50/0,02 мл,Антигенные свойства. Серологическая идентификация штамма 9 Каз клс использованием иммуных асцитныхжидкостей к 114 арбовирусам 27 антигенных групп не выявила антигеннойсвязи с известными арбовирусами за 50исключением односторонней связи свирусом Повассан. В РСК антиген вируса Повассан взаимодействовал симмуной асцитной жидкостью (ИАЖ)к штамму Казкл, в то же время 55антиген штамма Казкл не реагировал с ИАЖ к вирусу Повассан, Антигенное различие штамма Казкл от вирусов Повассан и клешевого энцефалита выявлено и в реакции торможения гемагглютинации. Серологическая идентификация штамма Казклв РСК и РТГА согласуется с даннымиреакции биологической нейтрализации,Так, штамм Казкл не нейтрализовался ИАЖ к вирусу Повассан, а индекс нейтрализации вируса Повассанс ИАЖ к штамму Казкл составилвсего 2,5 18, при индексе нейтрализации 5,0 18 изучаемого штамма с гомологической ИАЖ,Штамм У Казкл при иммунизации лабораторных животных вызываетобразование комплементсвязывающих,преципитирующих и вируснейтрализующихантител.У больных людей с остролихорадочными заболеваниями, вызываемымивирусом Алма-Арасан, также в сыворотках крови выявляются комплементсвязывающие, преципитирующие и вируснейтралиэующие антителаПатогенные свойства вируса дляживотных. Вызывает смертельную инфекцию у новорожденных и взрослых белыхмышей при внутримоэговом заражении,Инфекционный титр вируса в мозгу достигает 8,0 1 я 1.0 50/0,02 мл.Патогенные свойства вируса АлмаАрасан для людей, Вирус Алма-Арасанявляется патогенным и для человека.При обследовании остролихорадочных больных роль этого вируса в инфекционной патологии установленав 27 случаях. У этих больных наблюдались явления серозного менингита,Для получения диагностическихпрепаратов штамм Р Казкл размножают путем внутримозгового заражения новорожденных белых мышей.Из мозга животных, взятых на высотеклинических проявлений заболевания,1готовят диагностический антиген путемсахаро-ацетоновой экстракции,П р и м е о. Приготовление имммунной асцитной жидкости,Лабораторные животные - взрослые белые мыши самки, Проводят пятикратную иммунизацию с интервалом в 7 дней, способ введения - внутрибрюшинный, Объем вводимой вирусосодержащей суспензии при 1 и 2 -й иммунизации - 0,2 мл, при 3,4,5 - й - 0,25 мл.Суспензию перед введением смешивают с равным объемом полного адьюванСоставитель Г.СмирноваРедактор Н,Швыдкая Техред Ж.Кастелевич Корректор М.Пожо Заказ 6069/26 Тираж 524 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 118 та Фрейнда.Через 1 сут, после 5-й иммунизации внутрибрюшинно вводят асцит - загсоаа 180 ТС. Спустя 13- 14 дней после введения асцита получают асцитную жидкость, содержащую 5.з комплемент-связывающие антитела. Иммуная асцитная жидкость не теряет активности и специфичности после лиофилиэации, что доказано повторной проверкой активности пре О парата по реакции связывания комплемента. Титр иммуной асцитной жидкости предлагаемого препарата с гомологичным антигеном составил 1;256, с гетерологичным антигеном вирусов антигенной группы В реакция была отрицательной.Чля лабораторной диагностики заболевания человека, вызванного вирусом Алма-Арасан, взят материал для исследования - сыворотки крови от больных людей с подозрением на арбовирусные инфекции, взятые в начальном периоде заболевания и 2077 4реконвалесценции. Проводят постановку серологических реакций - РСК,РТГА с использованием сахаро-ацетоноаого антигена, приготовленного иэвируса Алма-Арасан штамм У Каэкл. Реакции ставятся по общепринятому способу - микрометодом на аппарате Такачи.У больной Т. была взята сыворотка крови в 1-й день заболевания27.05,83. В РСК и РТГА результатыс антигеном штамма Каэкл былиотрицательными. В сыворотке крови,взятой 30.05.83, обнаружены антитела к указанному штамму соответственно 1:64 и 1: 10, а в сыворотке, взятой 8,06,83, титр был 1:128 и 1:40,в то время как в тех же реакцияхантитела к другим арбовирусам (ЗН,Карши, Узун-Агач и др.) не выявились. Таким образом, приготовленныйиз предлагаемого штамма вирусаантиген позволил лабораторно установить этиологию заболевания.