Способ получения сорбента для аффинной хроматографии белков

Э СОВЕТСКИХсаюимсмкнип СПУБРИН 511 фС 08 В 37 1 27 Смолянин исследоваадной микро Ь 0 осЬеш 279-284.(71) Всесоюзный научнотельский институт прикбиологии(56) Куап 1,.0 и др. АгОорЬуэ, т, 160, 1974,(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА ДЛЯ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ БЕЛКОВ взаимодействием декстрана мол.м.110 - 4 10 , содержащего фикси -4 Срованный на нем триаэиновый краситель, и агарозы, о т л и ч а ю щ и с я тем, что, с целью его упрощения смешивают равные объемы водных раст воров декстрана и агарозы концентра цией 6-10 мас.7 при 50-60 С, смесь охлаждают и получившийся гель измельчают двухкратным продавливанием через сетку диаметром пор 200 - 300 мкм..4,4 4,3 4,75 2,9 2,9 3,45 3,4 3,65 3,6 Изобретение относится к производству носителей для хроматографии и может быть использовано на предприятиях, получающих сорбенты для аффинной хроматографии белков и 5 занимающихся очисткой белковых препаратов.Цель изобретения - упрощение процесса получения сорбента.П р и м е р 1. 9,5 г декстрана с фиксированным на нем триазиновым красителем СЬасгоп Ь 1 пе ГЗСА (мол.м. декстрана х 10 ) растворяют в 150 мл воды, нагревают до 50 С и смешивают с 150 мл водного 107-ного 15 раствора агароэы, нагретого до 60 С. Смесь помещают в водяную баню для охлаждения. После застывания гель разрезают на кусочки 1 х 1 см и продавливают дважды через сетку с 20 диаметром пор 200 мкм. После этого проводят декантацию в воде до тех пар, пока надосадочная жидкость станет прозрачной и бесцветной, после чего сорбент помещают в хроматогра фическую колонку и промывают после.довательно 1 М КС 1 (20-кратное промывание) и 20 мм трис-НС 1 буфером, рН 7,4 (5-кратное промывание), После промывки иммобилизованным остается 30 около 983 первоначально взятого декстрана. П р и м е р 2. 16,5 г декстрана с фиксированным на нем триазиновым красителем С 1 Ьасгоп Ь 1 це ГЗСА (мол. м. 4 х 10 ) растворяют в 150 мл воды, нагревают до 60 С и смешивают с 150 мл водного 6 Й"ного расто вора агарозы, нагретого до 50 С. Смесь помещают в водяную баню для охлаждения. После застывания гель Альбумин человеческий(мол. м. 68000) 64 гразрезают на кусочки 1 х 1 см и продавливают через сетку с диаметром пор 300 мкм. После этого проводят декантацию в воде до тех пор, пока надосадачная жидкость станет прозрачной и бесцветной, после чего сорбент помещают в хроматографическую колонку и промывают последовательно 1 М КС 1 (20-кратное промывание)и 20 мм трис-НС 1 буфером, рН 7,4 (5-кратное промывание). После промывки иммобилизованным остается около 977 декстрана,П р и м е р 3. 13,1 г декстрана с фиксированным на нем триазиновым красителем СЬасгоп Ь 1 ие ГЗСА (мол,м. 2 х 10 ) растворяют в 150 мл воды, нагревают до 55 С и смешивают с 150 мл водного 87-ного раствора агароэы, нагретого цо 50 ССмесь помещают в водяную баню для охлажденияПосле застывания гель разделяют на кусочки 1 х 1 см и продавливают дважды через сетку с размером пор 250 мкм. После этого проводят декантацию в ваде до тех пор, пока надосадочная жидкость станет прозрачной и бесцветной, после чего сорбент помещают в хроматографическую колонку и промывают последовательно 1 М КС 1 (20-кратное промывание) и 20 мм трис-НС 1 буфером, рН 7,4 (5-кратное промывание). После промывки Фиксированным остается около 987 декстрана.Сравнительные да 1 нные по емкости сорбента даны в табл. 1; в табл,2 - зависимости количества Фиксированного декстрана в агарозе от его мол. массы; в табл. 3 - зависимости емкости предлагаемого сорбента от диаметра пор сетки для продавливания агарозы. Емкость сорбента, мг/мл, по способу1168564 Таблица 2 Мол.м,декстрана 100 4 10 93 85 70 100 100 93 82 100 100 100 еТаблица 3 Емкостьр Х Диаметр пор, мкм 67 50 85 100 100 200 100 300 400 . 81 500За 1003 емкости принята емкость при диаметре частиц геля 200-300 мкм.Составитель И. СтояченкоТехред М.Кузьма Корректор В. Синицкая Редактор Н. Гунько Заказ 4561/23 . Тираж 475 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Уагород, ул. Проектная, 4 Концентрацияагарозы,Е 2 ф 10 1.10 0,510 4 10 б 210 1 10 0,5 10 4 1 О 210 1 10 0,5 10 Количествозафиксированногодекстрана,7