Способ получения иммуносорбента

(51)А 61 К 47 00 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ской емксоба, исетром пор оаминирован 1 лью увелсорбентпользую1 ОО допроводя2 С ост т л и ч ачестве ыворотк крови,3. Спосо ю щ и и с я ков использ вист эхинокпо и, 1 о тем, что в качеств т белки жидкости л ел" ка. Спосои й с я поп. 1, о,тлич тем, что в качеств т белки экстракта кокка. ков испол воцист альв ГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71) Ордена Трудового Красного Знамени институт медицинской паразитологии и тропической медициныим. Е.И, Иарциновского(56) Авторское свидетельство СССРУ 651814, кл. А 61 К 47/00, 1981.(54)(57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИИИУНОСОРБЕНТА путем аминирования силохрома -аминопропилтриэтоксисиланомс последующей обработкой аминосилохрома глутаровым альдегидом и ковалентным присоединением белков, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с це ичения специфич а и упрощения сп т силохром с днам 200 нм и реакцию т в водной среде пособ по п. 1, о ю щ и й с я тем, что в белков используют белки50 55 Изобретение относится к областимедицины, преимущественно к иммунологии, и может быть использованодля приготовления иммунологических.препаратов в паразитологии.Целью изобретения является увеличение специфической емкости сорбепта и упрощение способа,П р и м е р 1. Очистка сывороткикролика, иммунизированного цельнойющкостью ларвоцист эхинококка, отантител к белкам хозяина барана) .К 4 г силохрома с200 нм прили."вают 48 мл 5 Еного раствора "-аминопропилтриэтоксисилана в воде, Смесьонагревают при 90 С в течение 4 ч.К промытому водой и ьысушенпому прио70 С аминосилохрому добавляют 60 мп,5 Х -ного раствора глутарового альд гида в воде и обрабатывают прикомнатной температуре в течение 3 ч,После промывки сорбент инкубируютс 30 мч норма.тьной бараньей сыворотки с концентрацией белка 75 мг/млпри 4 С в течение 17 ч.,оПо окончании обработки сь.вороткусливают, сорбент тщательно промываютзабуференным 0,1фосфатным буферомфизиологическим раствором рН 7,4,содержащим 0,02 твина."20. К иммуносорбенту добавляют 150 мл сывороткикролика, иммунизированного цельнойжидкостью ларвоцист эхинококка барана, Смесь инкубируют при комнатнойтемпературе в течение 3 ч при постоянном перемешивании. Истощенную антисыворотку сливают и проводят иммунохимнческий анализ на полноту истощения антител к белкам хозяина. Иммуносорбент промывают забуференным фи"зиологическим раствором и элюируютантитела 10 мл 0,1 М раствора глицин-НС 1 буфера р 2,2, Злюцию проводят три раза по 3 мин,Выход антител с сорбента составил350 мг. Лнтисыворотка, истощеннаяот антител к хозяину паразита, былаиспользована для характеристики антигепных препаратов паразита (эхинококка) и для оценки пригодности зрит"роцитарного диагностикума.р и м е р 2. Выделение специфических антител к антигенам пара. -зита из кроличьей антисыворотки про-тив жидкости ларвоцист эхинококка.К 4 г силохрома с й 200 нм, обработанного -аминопропилтриэтоксисиланом и глутаровым альдегидом так,1 О 15 20 25 30 35 40 45 как в примере 1, приливают 30 мл раз.веденного лиофилизата эхинококковойжидкости (от барана) с концентрациейбелка 1 О мг/мл. Смесь инкубируютопри 4 С в течение 17 ч, По окончанииобработки надосадочный белковый раст"вор сливают, сорбент промывают также, как в примере 1К иммуносорбенту добавляют 30 мл кроличьей аптисыворотки против жидкости ларвоцистэхинококка, очищенной от антител кхозяину паразита, и инкубируют .прикомнатной температуре в течение 4 чпри перемешивании. Истощенную антисыворотку сливают, промывку иммуносорбента и элюцию антител проводяттакже, как в примере 1,Иммунохимический анализ истощен- .ной аптисыворотки показал отсутствие в ней антител к антигенам паразита. Выход антител с. сорбента соста"ьил 45 мг, Выделенные антитела были использованы для иммунохимического анализа антигенных препаратови для получения эрптроцитарного антительного диагностикума.П р и м е р 3, Очистка сыворотки кролика, иммунизированного цельным экстрактом ларвоцист альвеококка, от антител к белкам хозяина(хлопковой крысы), К 4 г силохромас й 100 нм, обработанного-аминопропилтриэтоксисиланои и глутаровымальдегидом так, как в примере 1, приливают 40 мл нормальной сывороткихлопковой крысы с концентрациейобелка 70 мг/мл и инкубируют при 4 Св течение 17 ч. К отмчтому также,как в примере 1, иммуносорбенту приливают 80 мл сыворотки кролика, иммунизированного цельным экстрактомларвоцист альвеококка. Смесь ипкубируют при комнатной температуре втечение 3,5 ч при постоянном перемешивании. Истощенную сыворотку сливают и проводят иммунохимический анализ на полноту истощения антител,Промывку иммуносорбента и элюцию антител проводят так, как в примере 1,Выход антител с сорбента составил 1 Об мг. Иммунохимический анализ истощенной антисыворотки показал, что в ней присутствуют антитела к белкам хозяина паразита. После повторной очистки антисыворотки па иммуносорбенте она была использована для характеристики аптпгенных препаратов паразита (альвеококка).05 Составитель П. БондарцевРедактор П. Горькова Техред М.Гергель Корректор С. Черни Заказ 8128/2 Тлрад 721 11 одпдсноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Филиал ЛПП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 11 Ь 35П р и м е р 4. Выделение специфических антител к антигенам паразита из кроличьей антисыворотки против экстракта ларвоцист альвеококка.К 4 г силохрома с 6 190 нм, обработанного-аминопропплтриэтоксисиланом и глутаровым альдегидом так, как в примере 1, приливают 54 мл экстракта ларвоцист альвеококка с концентрацией белка 20 мг/мп. Смесь ин О кубируют при 4 С в течение 17 ч, К отмытому так, как в примере 1, иммуносорбенту приливают 48 мл очищенной от антител к хозяину паразита анти- сыворотки против экстракта ларвоцист 15 альвеококка и инкубируют при комнатной температуре в течение 4 ч при перемешивании, Истощенную антисыворотку сливают, промывку иммуносорбента и элюцию антител проводят также, 20 как в примере 1.Выход антител с сорбепта составип 42 мг, Иммунохимпческпй анализ истощенной антисыворотки показал отсутствие в ней антител к антнгепам нара зита. Выделенные антитела были исполь"зовапы для получения эритроцитарного антнтельпого диагностикума.ГГримененпе сплохрома со средним диаметром пор от 100 до 200 нм в качестве основы обеспечивает большую емкость иммуносорбента в конкретных иммунологических системах. Использование воды вместо толуола на стадии аминирования силохрома "-аминопропилтриэтокснсиланом упрощает способ и делает его неогнеопасным,Полученный иммуносорбент может быть эффективно использован для выделения специфических антител к анти- генам паразита и для препаративной очистки антисыворотки. Выделенные антитела могут быть применены для 1приготовления антительных эритроцитарных диагностикумов и в иммунохимических исследованиях. Очищенные от антител к белкам хозяина анти- сыворотки могут быть использованы для характеристики антигенпых препаратов и для оценки пригодности эрнтроцптарных диагностикумов,