Способ выделения триозида (25 )-фурост-5-ен-3, 22, 26 триола -26-0 -глюкопиранозида

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 4(5 ц С 07 д 7 ВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ ГОСУДАРСПО ДЕЛ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ау Вьаз 6 С 1ии смесью хлорофооотношении 2:1 сографией экстракодой на сефадекс рма и метанола впоследующей хрома"а дистиллированной .С,(21) 3633140/23-04(71) Отдел генетики растений Адавской ССР и Институт зоологифизиологии АН Молдавской ССР(56) 1. Авторское свидетельствоР 722121, кл. С 07 3 71/00,С 07 Н 15/24. где С 1 с - глюкоза,КЬа - рамноза, о т л и ч а ю щ и с я тем, что семена баклажанов (Зо 1 ащп ще 1 апнепа 1,.) подвергают экстра 901162817 А 2. Владимиров Ю.А., Аргаков А ИПерекисное окисление липидов в биологических мембранах. И., "Наука",1972, с. 241-243,3, Кононов В.Н., Голышев П.А.Хачапуридзе Э.Л. Среда для замораживания спермы хряка. - "Свиноводство"1975, Мф 11, с. 26-28.(54)(57) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ТРИОЗИДА1162817 о д,глюосге 0 50 Изобретение относится к способу получения нового природного гликозида - триоэида (252)-фурост-енгде С 1 с - глюкоза, КЬа - рамноза.Цель изобретения - способ выделения нового природного стероидного гликозида - триозида (25 К)-Фурост- -5-енр,22 о,26 триола 1-26-0-71-0- -глюкопиранозида, обладающего более выраженными антиоксидантными свойствами в процессе перекисного окисления липидов при консервации семени хряков-производителей.Цель достигается тем, что согласно способу семена баклажанов (Во 1 апцш ше 1 апяепа Ь.) подвергают экстракции смесью хлороформа и метанола в соотношении 2:1 с последующей хроматографией экстракта дистиллированной водой на сефадексе С.Выделенный целевой продукт контролируют в тонком слое силикагеля ТХС в системе хлороформ-метанол-вода 65:35:10 нижний слой КЕ = 0,26,Полученное вещество - порошок белого цвета с т.пл. 179-180 С, о (с = 1,0, вода). Растворим в воде метаноле, пиридине, не- растворим в серном эфире, хлороформе, ацетоне. Препарат не гигроскопичен, устойчив при хранении. В ИК- спектре присутствуют полосы поглощения 3400 смширокая полоса, 900 см широкая полоса. Строение вещества формулы 1 доказано методами полного и частичного гидролиэа, ферментативного расщепления, перйодатного окисления, метилирования и изучения полученных продуктов с помощью БХ-, ТСХ-, ГЖХ-, ИК-спектроскопии и массспектрометрии.При полном кислотном гидролизе выделен и идентифицирован стероидный агликон - .диосгенин спл. 206-.208 С, Ы.ЗЯ - 120(с = 1,0, СНС 15),-Зр,22 о,26 триола 1-26-0-р-Р-глюкопиранозида, обладающего антиоксидатными свойствами, общей Формулы ИК-спектр 3 О, 980, 920, 890, 680 см- И 414 у.е. ВЕ = 0,45 в системе хлористый и илен-ацетон 49:1 ТСХ с свидетелем. В олигосахаридной части после гидролиза в виде производных ацетатов альдононитрилов методом ГЖХ обнаруживают смесь Р-глюкозы и Ь-рамнозы в соотношении 3:1.Ферментативное расщепление 1- коэидазой проводит к триоэиду ди нина, состоящему из 0-глюкозы и Ь-рамнозы (2:1). Последовательность присоединения моносахаридных остатков определяют с помощью частичного кислотного гидролиза 17.-ной Н 280 в метаноле, получая при этом три прогенина. При гидролизе монозида в моносахаридной части обнаружена одна молекула Р-глюкозы, в биозиде - две молекулы Р-глюкозы, а углеводная цепь триоэида состоит из смеси 0-глюкозы и Ь-рамноэы в со отношении 2:1. После метилирования прогенинов и последующего метанолиэа полученных перметильных производных метилгликозиды идентифицируют с помощью ГЖХ. Обнаружены и идентифицированы следующие моносахаридные производные: для монозида - с и р"метил- -2,3,4,6-тетра-О-метил-глюкопиранозид, биозида - Ы и р-метил,3,4,6 -тетра-метил-глюкопиранозид и Ю и р-метил,4,6-три-О-метил-глюкопиранозид, триоэида - р и я-метил- -2,3,4-три-О-метил-Ь-рамнопираноэид, Ы,р-метил,3,4,6-тетра-О-метил-П- -глюкопиранозид и е,р-метил,6-ди- -0-метил-глюкопиранозид (1:1:1). При метилировании и метанолизе соеди. нения формулы Т также обнаружены Ы,р-метил,3,4-три-О-метил-Ь-рамно1162817 г белка, при замораживанииоттаивании Виж контрол кстра 83+Оь 001 Оь 079 йОьО 97+0,004 Виж-деструктурныи тран - аналог 5+0,001 Виж- де триозщ (25 -5-еньЗрь 22 ол-0-р- пиранозид стран - )-фурост- Ы 26 три- -глюко 71+0,00 0,066+0,00,069+0,0 пиранозид,. р-метильЗь 4 ьб-тетра- -0-метил-Р-глюкопиранозид и сьр-метил,б-ди-О-метил-Р-глюкопиранозид (1:2: 1).Дополнительное подтверждение ре зультатов метилирования получают после перйодатного окисления гликозида формулы 1 и последующего кислотного гидролиза. При этом в гидролизате обнаружена только глюкоза. Конфигурацию гликозидных центров опреде ляют по разности молекулярных вращений гликозида и его прогенинов.П р и м е р. 1 кг воздушно-сухих семян баклажанов (Яо 1 апщп ше 1 апяепа Ь.) измельчают и экстрагируют смесью хлороформа и метанола в соотношении 2:1, Экстракт разбавляют водой, водно-метанольный слой отделяют в делительной воронке, концентрируют в вакууме, получая 36 г сухого остатка. 18 г сухого остатка.наносят на колонку с сефадексомСь элюируют водой. Выделение целевого продукта контролируют в системе хлороформ-метанол-вода 65:35:10.В результате трехкратного хроматографирования получают 2 г вещества формулы 1, что составляет Оь 4% от веса исходного сырья.30Об интенсивности развития перекисного окисления липидов (ПОЛ) судят по количеству продукта - малонового диальдегида (ИДА)ь который выражают в ммолях на 1 кг белка семени хря ка, с использованием молярного коэф-, фициента экстинции, равного1,56 10 э М " с ь и опРеделЯют по ме. - тоду 2 , В качестве основной среды для разбавления и замораживания се мени хряков-производителей используют синтетическую среду по прописи Кононова ГЗ. Соединение формулы в составе указанной среды испытывается в концентрациях 0,001, 0,002 и Оь 0047., Оптимальная концентрация 0;0027В таблице приведены результаты действия триозида 1.(25 К)-фурост- -ен-Зрь 22 оь 26 триола-0-3-Р-глюкопиранозида в концентрации Оь 002 Х на ПОЛ в семени хряка в сравнении со структурным аналогом - 3-О-Д-Р- -ксилопираноэил(1-ь 3)-0-6-0-натрЮ- сульфонато-а-Р-галактопираноэил(1-ь 4)- -О-0-натрийсульфоната-Р-глюкопиранозил( -ь 2) -0-6-0"натрийсульфонато-д-Р-глюкопиранозил(1-ь 4)-0-6-0- -натрийсульфонато-р-Р-галактопираноэид 1) -25 К-спиростань 3 ь 15 р-триолом в оптимальной концентрации Оь 0023. Как видно из таблицы, при разбав лении семени хряка защитными средами, содержащими соединение форму" лы 1, наблюдается снижение уровня ИДАь по сравнению с контрольной группой и со структурным аналогом во всех стадиях технологической обработки, особенно после замораживания- оттаивания, что указывает на выраженную антиоксидантную активность соединения общей Формулы(1),Таким образом, предлагаемым способом получают новое химическое соединение, присутствие которого в разбавляющей среде способствует ингибированию процесса перекисного окисления липидов при криоконсерва" ции семени хряков-производителей. 720 ь 003 0,086+0,003