Способ определения глюкозы

953564 ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ . Союз Советски кСоциалистическиеРеспублик(5)М, Кл. 6 01 И 33/1 т 8 аоаудвретюиьй комитет СССР ао делам иаооретеиий. и открытий(088. 8) Ъ ф%ЯВугС.О. Бачурин, С.Д. Варфоломеев и И,В. БерезсМосковский ордена Ленина, ордена Октябрьск Революциии ордена Трудового Красного Знамени госуда ствейныйуниверситет им. И.В. Ломоносова(51) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ Изобретение относится к медицине,а именно к методам биохимическогоанализа биологических жидкостей ипредназначено для определения глюкозы ферментативным методом,Известен способ определения глю 5козы путем окисления ее в анаэробных условиях глюкоэоксидазой, иммобилизованной на электроде 111.Однако известный способ отличается крайне низкой чувствительностью.Величина плотности тока, снимаемогос такого электрода составляет9,5 мкА/см . Причиной низкой чувствительности анализа является небольшая емкость электрода по ферментуи отсутствие хорошего электронногоконтакта между активным центромфермента и электродом.Цель изобретения - повышение чув- гоствительности способа.Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу определения глюкозы путем окисления ее в анаэробных условиях глюкозоксидазой,иммобилизованной на электроде, глюкозоксидазу иммобилизуют на электроде, приготовленном из полимерногоматериала на основе комплекса полипропаргилпиридила с тетрацианхинодиметаном.Способ осуществляется следующимобразом.Проводят анаэробное окисление глюкозы глюкозооксидаэой, иммобилизованной на электроде, приготовленномиз полимерного материала на основекомплекса тетрацианхинодиметана сполипропаргилпиридином,Иммобилизацию глюкозооксидазы проводят с осаждением фермента с осад"ком комплексной соли полипропаргилпиридиния с тетрацианхинодиметаномТЫО. При этом получают препарат иммобилизованной глюкозооксидазы, содержащей 350 мг белка/г носителя.Полимер с включенными в него молекулами фермента наносят на платиновую3 Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, 1.аЬода Е,(1.1 п С. С. апдУпсагд .,В. - нЕесйгосЬевса 1Еча 10 айоп оГ 01 цсоэе Охсаэе тщоЬ 1 ген Ьу ОНегепй МейЬодэ,"ВоесЬпооду апд Воепц, ХЧ 1,975, 413-422. 9535сетку и используют в качестве электрода.П р и м е р . Изготовление электрода. Предварительную иммобилизациюглюкозооксидазы и в комплекс полимера бполи-пропаргилпиридила (Р-РР) стетрацианхинодиметаном (ТСНО) проводят по следующей методике: к раствору60 мг бромида Р-РР в 3 мл дистилли"рованной воды добавляют 4 мл водного Ораствора глюкозооксидазы (6,25 мл сухого препарата/мл раствора). При пос"тоянном перемешивании к полученномураствору добавляют 8 мл водного раствора .ТОНО концентрацией 10 мг 5.ТОНО. мл раствора. Смесь перемешивают в течение 1 г, и образующийсяосадок Р-РР ТОНЯ с соосажденным ферментом отделяют от супернатанта нацентрифуге при 6 тыс. об/мин в течение 30 мин. Полученный препарат дважды промывают дистиллированной водой,вновь отделяют на центрифуге и сушатпри комнатной температуре. Содержа-,ние фермента в препарате составляет д350 мг/г носителя.Для изготовления ферментного электрода берут платиновую сетку, на которую ровным слоем наносят препаратиммобилизованной глюкозооксидаэы ипомещают под пресс (150 кг/см ) на15 мин.Определение глюкозы. В электрохи-,мическую ячейку, допускающую продувку раствора газом, помещают 50 млисследуемого раствора глюкозы в буфере (фосфатр=1,5 М, рН 7,35,30 С). В качестве рабочего электродаиспользуют электрод с иммобилизованной глюкозооксидазой, в качествеэлектрода сравнения - нормальный каломельный электрод. Ячейку с раствором глюкозы в течение 30 мин продувают аргоном и задают на рабочем электроде потенциал +Е=140 мВнкэ. За"висимость плотности тока, снимаемогос такого электрода, от концентрацииглюкозы в растворе является линейной. Хорошие электропроводящие свойства носителя и высокое содержаниеглюкозооксидазы позволяют получитьток в 110 мкА/см , что обеспечиваетв 12 раз увеличение чувствительностиопределения глюкозы,Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает возможность определения концентрации глюкозы в анаэробных условиях, т.е. без специальной продувки проб кислородом; зна-чительное повышение чувствительностиферментного электрода по отношениюк глюкозе, что расширит областьприменения ферментных методов анализа на глюкозу и повысит их чувствительность,Формула изобретения Способ определения глюкозы путем окисления ее в анаэробных условиях глюкозоксидазой, иммобилизованной на электроде, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, глюкозоксидаэу иммобилиэуют на электроде, приготовленном из полимерного материала на основе комплекса полипропаргилпиридила с тетрацианхинодиметаном.Составитель В. Арцатбанов Редактор А. Козориз Техред М. Рейвес Корректор И. Муска Заказ 2 9/73 Тираж 7 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП "Патент , г. Ужгород, ул. Проек