Способ получения протаминов

ЯО 1144700 А СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 4(51) А 61 К 37 08 А 61 К 35 ЬО САНИЕ ИЗОБРЕ РСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ И КА и соединит цию, фильт промывку о и повторну ющим выдел о т л и ч и Н.В. Какаровтехнологическиймолочной промышл целью с повышен.та, повторив натрий-ацсодержащемполученный Ьеш.,ультразвук деляют цел катионообм АМИНОВ жирав ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРГЮ ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЦТИЙ(71) Иосковскийститут мясной иности(56) 1. Авторское свидетельствопо заявке В 3339726/28-13,кл. А 61 Х 37/08, 1981.2. Апдо Т. НаеЬ 1 войо С.З. ВЫ45, 1958, р. 453.(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТключающий очистку гонад рыб от льной ткани, гомогенизаование, центрифугирование,адка раствором Рингераю гомогенизацию с последунием целевого продукта,ю щ и й с я тем, что,ращения времени получениячистоты целевого продукую гомогенизацию проводятетатном буфере рН 4,6,1,4 И натрия хлорида,гомогенизат обрабатываютом в течение 2-3 мин и выевой продукт сорбцией наеннике,1144Изобретение относится к биохимии,может быть использовано для получения протаминов из гонад рыб.Известен способ получения протаминов из молок рыб, заключающийсяв экстракции сырья водным растворомнеорганических кислот, сорбции протамина из полученного экстракта прирН 6-10 ионитом в БН Форме, представляющем собой сополимер акрилонит 1 Орита и дивинилбензола с содержаниемпоследнего 15-407 и десорбции целевого продукта раствором неорганической кислоты 1 .Однако известный способ не обеспечивает получения полностью обессоленных белков.Известен также способ полученияпротаминов, заключающийся в том,что гонады рыб очищают от жира и соединительной ткани и гомогенизируютв растворе Рингера (0,657 МаС 1,0,0147 КС 1, 0,0127. СаС 1 0,012ВаНСО 0,0017 МаН РО), Фильтруютчерез хлопковую ткань и центрифугируют. Осадок промывают растворомРингера и повторно гомогенизируютв 2 М ИаС 1, К солевому растворудобавляют насыщенный раствор сульфата меди для осаждения ДНК. К раствору добавляют 1/8 М пикрата натЗОрия. Осадок пикрата протамина отделяют центрифугированием и растворяют в 677-ном водном ацетоне, Протамин-сульфат осаждают этиловым спиртом после добавления нескольких ка- З 5пель 2 М серной кислоты. Для очистки от пикрат-иона протамин-сульфатпереосаждают несколько раз из водного раствора спиртом 21,Такой способ позволяет получить ф 0протамины в нативном виде, однакоон трудоемок, требуется значительноевремя для получения протаминов",для получения пикрата натрия исполь-зуется взрывоопасная пикриновая кислота, Кроме того, необходимостьочистки от избытка пикрата натрияприводит к большому расходу спирта.Целью изобретения является сокращение времени и повышение чистотыцелевого продукта.Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу полученияпротаминов, включающему очисткугонад рыб от жира и соединительнойткани, гомогенизацию, Фильтрование,центрифугирование, промывку осадкараствором Рингера и повторную гомо 700 3гениэацию с последующим выделениемцелевого продукта, повторную гомогенизацию проводят в натрий-ацетатномбуфере рН 4,6, содержащем 1,4 М натрия хлорида, полученный гомогенизатобрабатывают ультразвуком в течение2-3 мин и выделяют целевой продуктсорбцией на катионообменнике,П р и м е р 1. Гонады АсдрепзегАе 11 агця очищают от жира н соединительной ткани, 5 г полученного материала гомогенизируют в 30 мл раствора Рингера и Фильтруют через хлопковую ткань, Осадок промывают раствором Рингера и центрифугируют при8000 об/мин в течение 10 мин, 100 мгполученного нуклеопротамина (сухойвес) повторно гомогенизируют в 10 мл0,05 М натрий-ацетатного буферарН 4,6, содержащего 1,4 М БаС 1, Полученный гомогенизат подвергают действию ультразвука на приборе УЗДН с силой тока 0,4 А и рабочей частоте 22 кГц 2 мин и центрифугируютпри 10000 об/мин в течение 20 мин.Надосадочную жидкость наносят на колонку с катионообменником АмберлитЦГ(1,5 х 5,0 см), уравновешенную0,05 М натрий-ацетатным буферомрН 4,6, содержащим 1,4 М ИаС 1. Колонку промывают последовательно исходным буфером, 0,2 н,уксусной кислотой и водой, Протамины элюируют0,1 н. НС 1 и рН быстро доводят до5-6 с помощью анионообменника Амберлит 1 РАв ОН Форме. Все операции проводят при 4 С. Полученныепротамины высушивают лиофильно.Аминокислотный состав выделенногопротамина следующий, мольн.7:Агя 51,8Нхз 9,41 юу 3 14,1С 1 х 0,9ТЬг 2,4Бег 6,1Рго 0,9С 1 у 4,7А 1 а 6,6Ьеп 2,8Получилось 26 мг хлоргидрата протамина.П р и м е р 2. Осуществляютто же, что в примере 1, при этомвремя.озвучивания равняется 1 мин,сила тока 0,6 А. Получилось 20 мгхлоргидрата протамина.П р и м е р 3. Осуществляютто же, что в примере 1, при этом1144700 4переосаждение протаминов из водногораствора спиртом; полностью исключается использование взрывоопаснойпикриновой кислоты и спирта.Кроме того, сокращается времяполучения протаминов с 5-6 до 1,82,0 дней. Составитель В, БрусиловскаяРедактор Н. Швыдкая Техред Ж.Кастелевич Корректор И. ЭРдейи Заказ 1018/4 Тираж 722 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3время озвучивания равняется З,мин,сила тока 0,8 А. Получилось 26 мгхлоргидрата протамина,П р и м е р 4. Осуществляютто же, что в примере 1, при этомвремя озвучивания равняется 5 мин,сила тока 0,8 А. Получилось 26 мгхлоргидрата протамина.Таким образом, при осуществлениипредлагаемого способа упрощаетсяметодика выделения протаминов, чтопозволяет исключить такие трудоемкиеоперации как осаждение ДНК сульфатом, меди осаждение протаминов пикратом натрия, разрушение пикрата протатмина водным ацетоном, многократное Избирательное сорбирование на катионообменнике протаминов позволяет полностью освободиться от балластных белков и продуктов их деструкции и значительно повысить чистоту протаминов. Отсутствие операции переосаждения протаминов ведет к интенсификации процесса,