Питательная среда для выращивания

,.8011 А 1 г ГОСУДАРСТВЕННЫ ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕ МИТЕТ ССС Й И ОТНРЫТ файф , 1 р ИЯ АНИЕ ИЭОБРЕТ ОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(54) (57) ПЩИВАНИЯ РАчающая бултингера, отем, что,рулентностдержит мони глюкозунии компонМаннозаГалактозаРамнозаГлюкозаБульон на оперевара Хора ИТАТЕЛЬНАЯБТЕБНЕЬЬАьон на оснтлич ас целью вои, она допнозу, галапри следуювентов, мас 24,Шегидевичтамова Ленина нинститут эрии им.Я.Р учспеКо 8)Ъ,вел,Ье 1 еПаратн. Под(56) 1. Агсп.ехрег.ч1977, 31, 9 1, бб,2. Ветериред, Д.Ф,Осис,238 (прото СРЕДА ДЛЯ ВЫРАНЬтО 010 д, вклюве перевара Хот.ю ы а я с йстановления вилнительно сотозу, рамнозуем соотношеф 10,1-",20,1-1,20,1-1,20,1-1,2120,5 1,60,12 35 л-Цистеинл-Глютаминовая кислота 0,15дл-Серии 0,2л-Иэолейцин 0,65л-Лейцин 0,065л-Фениланин 0,085л-Тирозин 0,09Са-пантотенат 0,002Никотиноамидная кислота 0,005Витамин В 1тиамин НСЕ 1 0,001Железо Е)цитрат 0 001Оротнаякислота 0,015 0,1В связи со сложной технологией изготовления эта среда не нашла применения в практике.Известна питательная среда длявыращивания Р,вц 1 Сосйа, соСтоящаЯ иэ бульона на основе перевара Хоттингера 23. 1 2 Ор 5 0,5 0,5 0,5 40 45 50 Однако Р,ац 1 Сосйа, выращиваемаяна этой питательной среде, обладаетвысокой степенью диссоциации и в процессе длительных пассажей снижает,свои вирулентные свойства,Целью изобретения является получение питательной среды, восстанав Изобретение относится К ветеринарной микробиологии, в частности к получению питательной среды для выращивания РавСецге 11 а щц 1 Сос 1 йа.Пастереллез - инфекционная болезнь многих видов .животных, в том 5 числе и птиц, вызываемая отдельными разновидностями Пастерелл.Для получения диагностических сывороток, а также препаратов специфической йрофилактики пастерелле зов сельскохозяйственных животных необходимо наличие штаммов с полноценной антигенной структурой. Раасецге 11 а ац 1 Сос 1 йа обладает большой степенью изменчивости, что сопровож" 15 дается снижением их иммуногенной активности и вирулентности. В связи с этим представляет важное значение восстановление утраченных пастереллами свойств путем выращивания ик на определенных средах, а получение полноценных питательных сред для культивирования пастерелл является актуальной проблемой.Известна питательная среда для выращивания Р,щц 1 Сосдйа 13 следую" щего состава:Иагнр 04 12 НЕО 321390 кнеР 04 1 р 36 . 10 1 ч аСЕ 1,19 207 Н О 0,25 1 Глюкоза 6,0 30 л-Аргинин, НСЕ 0,21 л-Аспаргиноваякислота ливающей вирулентность Р,щц 1 Сос 1 са различных серологических типов вследствие деблокирования синтеза сахаров в полисахаридной цепи, входящей в состав капсулы бактерий, ответственной за вирулентность.поставленная цель достигается тем, что питательная среда для выращивания РазСецге 11 а щц 1 Сос 1 йа, включающая бульон на основе перевара Хоттингера, дополнительно содержит маннозу, галактозу, рамнозу и глюкозу при следующем соотношении компонентов, мас.Манноза 0,1-1,2Галактоэа 0,1-1,2Рамноза 0,1-1,2Глюкоза 0,1-1,2Бульон наоснове перевара Хоттингера ОстальноеСпособ изготовления среды состоит в следующем.Берут навески маннозы 10-120 г, галактозы 10-120 г, рамнозы 10-120 г, глюкозы 10-120 г, В Каждую навеску в отдельности наливают дистиллированную воду до 100 мл, полученные растворы стерилизуют текущим паром, в колбу наливают по 10 мл растворов маннозы, галактозы, рамнозы и глюкозы и добавляют бульон на основе перевара Хоттингера до 1000 мл.П р и м е р 1, Питательная среда с содержанием маннозы,.галактоэы, райнозы и глюкозы по 0,1, бульон на основе перевара Хоттингера - до 100. При культивирования серологического варианта В Р,ац 1 СосЫа на этой среде значения Лд колебались в пределах 170-250 бактерий. П р и м е р 2, Питательная средас содержанием маннозы, галактоэырамнозы и глюкозы по 0,.6, бульонна основе перевара Хоттингера - до100, Значения .ЛД Р,в 111 Сос.6 а сероварианта В колебались в пределах150-220 бактерий.П р и м е р 3, Питательная среда с содержанием маннозы, галактозы, рамнозы и глюкозы по 1,2, бульон на основе перевара Хоттингера -до 100, Значения ЛД Г,вц 1 Сос 1 йасероварианта В колебались в пределах 200-270 бактерий.П р и м е р 4. Питательная среда с содержанием маннозы, галактоэы, рамнозы и глюкозы по 0,05,бульон на основе перевара Хоттингера - до 100. Значения Лд выращенной на этой среде культуры серова-.рианта В сосТавили 0,5-1 млн бактерий,П р и м е р 5. Питательная средас содержанием маннозы, галактозы,рамнозы и глюкозы по 1,8, бульон1100303 Питательные среды и значения ЛД выращенных на них культур (количество микробных клеток) СерологическиевариантыПасте- релл Известнаясреда прототип) Предлагаемая средаЕ 290 000 + 30000 35+20 Составитель В.РомановаРедактор Т.Веселова ТехредЛ. Коцюбняк Корректор А,ильин Заказ 4543/23 Тираж 522 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж"35, Рауйская наб., д. 4/5еФ авФилиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 на основе перевара Хбттингера - до100, КультУра Р,вц 1 Сосйа серова-.рианта В, выращенная на этой среде,имела значение ЛД 1-1,5 млн,бактерий,Из приведенных примеров следует, 5что оптимальной концентрацией сахаров маннозы, галактозы, рамнозыи глюкозы в питательной среде, обеСпечивающей восстановление вирулентности Р,щи 1 Сос 1 да, является 0,1-1,2. 10Концентрация сахаров ниже 0,1 недостаточна для деблокирования ферментов, ответственных эа синтез полисахаридной цепи капсульного антигена, Избыточное содержание сахаров )5(выше 1,2 ) также не обеспечивает деблокирование Ферментов, по-видимо"му вследствие повышенного парциального давления и нарушения осмоса идиФфуэии сахаров внутрь бактериаль"ных клеток.П р и м е р 6, Для изучения восстановления вирулентности культурРаесецге 11 а ви 1 сос 14 а различныхсерологических типов вариантовкультивировали одни и те же штаммыРавсеиге 11 а ац 1 сос 1 йа в предлагаемойи известной (бульон Хоттингера )сре"дах.Вирулентность Пастерелла мультоцида различных серологических вариантон, выращенных в известной ипредлагаемой питательной средб, приведена в таблице,Из приведенных данных следует,что культивирование Пастерелла муль- З 5тацида разных серовариантов в предлагаемой среде способствует восстановлению утраченной вирулентностикультур, вследствие чего вирулентность их повышается в десятки и несколько тысяч раэ. Поскольку вирулентность пастерелл коррелирует симмуногенностью, то предлагаемая питательная среда может быть использо"вана не только для восстановления вирулентности штаммов, но и для изготовления более активных вакцин пастереллеза. А 1.160,000 С 50000 175+100В 145 000 + 5000 35+10Д 580 000 + 10000 6+4 ЛД- количество микробных клеток,вызывающих гибель 50 зараженных белых мышей массой 16-18 г.