Способ выращивания микобактерий туберкулеза

9) (1 СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛ ИСТИ ЧЕСНИРЕСПУБЛИК. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ ЕТЕЛЬСТВУ К АВТОРСИОМ Р 48О.И. Белякова, .Ф. Гавриленко имии им. А.В.Палла аучно-исследоватуберкулеза88.8)А.С. Микробиолоробиологических "Медицина", 1978,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛДМ ИЗОЬРЕТЕНИй И ОТКРЫТИЙ(71) Институт биохдина и Львовский нтельский институт(54)(57) СПОСОБ ВИРАЩИВАНИЯ МИКО- БАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА путем посева исследуемого материала на среду Левенштейна-Йенсена инкубации посевов, о т л и ч а ю щ и й с я тем что, с целью повышения высеваемости мико- . бактерий, на поверхность питательной среды перед посевом наносят раствор энтерохелина в 1-ном НаГРО 4, содержащем ГеСР6 НО, в концентрации 20-30 мкг/мл среды.Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается способа выращивания микобактерий туберкулеза.Извесен способ выращивания мико бактерий туберкулеза путем посеваисследуемого материала на среду Левенштейна-йенсена и инкубации посевон 1 .Однако данный способ нв обеспечивает высокой высеваемости микобактерий.Цель изобретения - повышение внсеваемости микобактерий.Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу выращивания микобактерий туберкулеза путемпосева исследуемого материала насреду Левенштейна-йенсена и инкубации посевов на поверхность питательной среды перед посевом наносят раствор энте 1 охелина в 1-ном МаНРО 4,содержащем ГеС 8 6 НО, н концентрации 20-30 мкг/мп среды.П р и м е р 1Рабочий растворэнтерохелина 2,3-диоксибензоилсерин)готовят следующим образом.100 мг энтерохелина растворяютв 20 мл 1-ного ЙаНР 04, добавляют43,7 мг ГеС 0610 и Фильтруют черезмембранный фильтр М 8,Суспензию музейного штамма микобактерий туберкулеза Н 37 Яу н концентрации 1 млн бактериальных тел н1 мл физиологического раствора засевают по 0,1 мл на плотную средуЛененштейна-.йенсена без энтерохелина,35с добавлением к среде 25 мкг/мл энтерохелина и с добавлением Ген на1 О а НР 04, Посевы ежедневно просматривают и оценивают результаты почислу выросших колоний. 40При учете результатов оказалось,что рост на среде с энтерохелиномпоявляется на 5-7-й день, в остальных пробах - на 11-13-е сутки.П р и ме р 2,Для исследования нлияны:,45Фэнтерохелина на высеваемость микробактерий туберкулезаиз органовморскихсвинок после интенсивной химиотерапиидесять здоровых животных заражают0,01 мг/кг суспензии микобактерийштамма В, 8 подкожно и правую паховую область, Спустя 3 недели после инфицирования животных поднергаютлечению изониазидом (15 мг/кг ирифадином 15 мг/кг ежедневно нтечение 3 мес. По истечении срокалечения морских свинок убивают хлороформом, а кусочки органов легкие,печень, селезенка) растирают в ступке и после обработки засевают на среды Левенштейна-йенсена, Финни 60 Левенштейна-йенсена с добавлением25 мкг/мл энтерохелина. Всего производят 90 посевов суспензии органов морских свинок. Посевы просматривают ежедневно в течении 2,5 мес,Роствозбудителя туберкулеза оцениваютпо числУ выросших колоний. Отрицательным результатом посева считаютотсутствие роста колоний через2,5 мес. инкубиронания и термостатепри 37 н С.В результате проведенного исследования оказалось, что после интенсивной химиотерапии экспериментального туберкулеза рост колоний микобактерий туберкулеза обнаруживаюттолько на среде Левенштейна-Йенсенас добавлением 25 мкг/мл энтерохелинаНа средах без энтерохелина,ни в одном случае не наблюдают роста колоний. Полученные данные свидетельствуют о том, что энтерохелин стимулирует рост микобактерий, у которыхв процессе химиотерапии значительноснижается биологическая активностьИзучение влияния энтерохелина нанысенаемость возбудителя туберкулезапроводят также путем посева мокротыбольных туберкулезом органов дыхания на среде Лененштейна-йенсена,Финни Левенштейна-йенсена с добавлением энтерохелина Всего производят 525 посевов мокроты от 175больных. Рост микобактерий туберкулеза обнаружен и 12 случаев на средеЛеЬенштейна-Йенсена с добавлениемэнтерохелина, На среде ЛененштейнаЙенсена и Финнбез энтерохелинарост микобактерий туберкулеза обнаружен лишь в 6 случаев,Данные исследования приведеныв табл. 1 и 2,В табл. 1 показано влияние энтерохелина на рост микобактерий туберкулеза на среде Левенштейна-йенсена.В табл. 2 представлена нысеваемость микобактерий туберкулеза изорганов морских свинок на различных средах,П р и м е р 3. Испытания с бычьимвидом микобактерий туберкулеза(штамм Воу .8) проводят в пробирке,так как инфициронанность бычьимвидом возбудителя незначительна, ина зараженных лабораторных животных.Результаты опыта аналогичны данным, полученным со штаммом Н,Использование предлагаемого способа позволяет повысить высенаемостьмикобактерий, что, в свою очередь,дает возможность повысить точностьдиагностики и ускорить рост микроорганизмон.1063836 Т а б л и ц а 1 Штамм Число проб Среда безэнтерохелина Штамм микобактерий туберкулеза 25.10-13 Штамм Н .40 5-7 То же 25 20 Таблица 2 Ф животных Срок появления первых колоний; день 85 34 80 34 10 63 26 20 65 26 64 19 66 68 24 31 26 70 26 П р и м е ч а н и е. На средах Левенштейна-Йенсена н финнбез энтерохелина роста колоний не наблюдается ни в одном случае. Составитель Г. СмирноваРедактор И. Рачкулинец Техред А,Бабинец Корректор А.Повх Заказ 10472/27 Тираж 523 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Иосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г, ужгород, ул. Проектная, 4 Среда с добавлением 25 мкг/мпэнтерохелинаГеСХу на 1%8 ауНРО 4 Среда ЛевенштейнаЙенсена с энтерохелином колонии Срок культивирования до появления колоний,дни 26 31