Способ получения -1, 6-глюкозидазы

ОП ИСА НИ ЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ р 545267 Союз Советских Социалистических Республик(23) Приоритет 01.04.69 (32) 01.04,68 51) М, Кл, С 12 Р 1 сударственныи комитет вета Министров СССРОпубликовано 30.01.77. Бюллетень4 Дата опубликования описания 09.03.77 делам изобретени и открытий 2) Авторы изобретен и ранцыао, Кацния) Ино наме Сугимото, Мамору Хасуда и Сузо Сакаи 1) Заявите Иностр Хаяси б тая фирмаа Компаниония) 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ а,6-ГЛЮ АЗ Изобретение относится к области ферментативного гидролиза крахмала, гликогена, декстрана и подобных веществ, а именно к способам получения а,6-глюкозидазы, характеризующейся относительно высокой активностью, проявляющейся при температуре незначительно превышающей 45 С,Известен способ получения и,6-глюкозидазы путем культивирования ее продуцентов, а именно Рзецдотпопаз агпу 1 одегагпоза 8 Впа питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли 1. С целью расширения ассортимента продуцентов а,6-глюкозпдазы согласно предлагаемому способу в качестве последних используют штамм 1 чосагд 1 а сога 111 па 1 ГО 3338.Этот штамм обладает способностью продуцировать а,6-глюкозидазу больше во внешней среде, окружающей клетку, чем в самих клетках. Штамм выделен из почвы, идентификацию его осуществлялн по справочнику Всгдеув Маппа 1 о 1 Ре 1 еггп 1 па 1 Ь е Вас 1 ег 1 о 1 оду (седьмое издание) .Штамм Мосагд 1 а сога 111 па 1 ГО 3338 характеризуется следующими морфологическими и культуральными признаками,Разветвляющиеся палочки в основном загнуты, 1,0 - 1,5:3,0 - 10,0 мкм. После сравнительно длительного процесса выращивания (т. е. старые культуры) клетки имеют форму 5 более коротких палочек и кокков.Клетки неподвижные, некислотоустограм-положительные. На желатинекруглые, выпуклые, гладкие, розовые, щие. Край колоний нитевидный.О После выращивания в столбике желатиныклетки имеют форму шляпки гвоздя, древовидные. Разжижения не наблюдается,На агаре колонии круглые, выпуклые, имеют закругленный выступ, гладкие, розовые, 5 блестящие илп матовые, край более светлый,нитевидный или с древовидными выступами.В ранних стадиях развития колонии состоят из разветвляющихся нитевидных палочек.По мере роста колоний клетки разрываются 0 внутри на короткие палочки, а снаружи оста.ются нитевидными.На скошенном агаре колонии иитчатые, выпуклые, гладкие, розовые, блестящие илп матовые, Рост древовидный или с выступами.5 На лакмусовом молоке реакция щелочная;красноватая пелликула, На картофельном агаре с глицерином колонии нитчатые, сухие, морЗаказ 108/20 Изд. М 144 Тираж 589 Подписное Ц 11 ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, 7 К, Раушская наб., д. 45Типография, пр. Сапунова, 2 щинистые, от желтовато-коричневого до кораллового цвета,На яичной среде по Дорсету колонии нитчатые, сухие, морщинистые, оранжевого цвета.На среде по Лиффлеру рост колоний аналогичен росту на яичной среде по Дорсеру, но розовый.Сахарозу, мальтозу н лактозу не сбраживает.Оптимальная температура между 22 и 25 С. Оптимальное значение рН между 6,8 и 8,0.П р и м е р 1. Получение а,6-глюкозидазы при помощи штамма Хосагйа сога 111 па 1 РО 3338.Штамм Иосагйа сога 111 па 1 ГО 3338 вносят в 100 мл культуральной среды, содержащей (%): пептон 1,0; дрожжевой экстракт 0,5; КгНРО 4 0,1; КаС 1 0,1; Мф 04 7 Н,О 0,05; Ре 804 7 НгО 0,001; разжиженный крахмал 1,4. Процесс осуществляют 4 дня при 30 С и перемешивании,Внеклеточная энзиматическая активность штамма 24,6, внутриклеточная 1,6, общая 26,2; рН среды 7,6,П р и м е р 2, В 1 л культуральной среды, аналогичной по составу среде в примере 1, вносят штамм Мосагйа сога 111 па 1 ГО 3338 и осуществляют процесс культивирования 3 дня при 30 С, перемешивании и рН 7,4. Внеклеточная энзиматическая активностьштамма 34, внутрнклеточная 16, общая 50.Сливают надосадочную жидкость, насыщают ее сульфатом аммония до получения 0,8 насыщенного раствора, Выпавцтий осадок отделяют центрифугированием, растворяют в воде, перастворившнеся примеси удаляют, раствор насыщают сульфатом аммония (до получения 0,8 насыщенного раствора), высалива ют и диализуют.Получают раствор энзима. Оптимум рН раствора 6 - 7, оптимальная температура 42 - 46 С. При повышении температуры до 50 С активность энзпма падает. Энзим не гидроли зует декстрин. Формула изобретенияСпособ получения и,6-глюкозидазы путемкультивирования ее продуцентов на питатель ной среде, содержащей источники углерода,азота и минеральные соли, отличающийся тем, что, с целью расширения ассортимента продуцептов, в качестве продуцента используют штамм Мосагйа сога 111 па 1 ГО 3338.25 Источники информации, принятые во вни.мание при экспертизе: 1. Патент СССР Мг 290542, кл. С 120 13/10,1971.