Способ реверсии л-форм микобактерий туберкулеза

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИК 1191 (11) А 1 11 4 С 12 Б /О ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУЛ 110 ТХА КООСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(7) Семипалатинский зоотехническоветеринарный институт(56) Муратов ВВ. Изучение микобактериальной популяции методом биологического пассажа. - В сборнике трудов ЦНИИ. туберкулеза. М., т. 31,с. 115-119.(54)(57) СПОСОБ РЕВЕРСИИ Л-ФОРМ МИБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА, включающиймногократное пассирование суспензииЛ-форм микобактерий через живой организм с одновременным контролем путем высева культуры на плотные питательные среды и микроскопии мазков,о т л и ч а ю щ и й с я .тем, что,с целью ускорения способа, пассирование проводят с интервалом в однисутки через 7-дневные куриные эмбрионы, при этом суспензию Л-форм микобактерий используют в дозе 0,1-0,2 мпна куриный эмбрион,12474)9 ВНИИПИ Заказ 4080/26 Тираж 490 Подписное Произв,-полигр. пр-тие, г. Ужгород ул. Проектная, 4 Изобретение относится к ветеринарии, в частности к изучению изменчивости возбудителя туребкулеза,Целью изобретения является ускорение способа. 5Способ осуществляют следующим обБерут 7-дневные куриные эмбрионы,путем овоскопирования определяют место расположения зародыша. Затем с 10соблюдением правил асептики производят заражение эмбрионов в желточныймешок культурами Л-форм микобактерийтуберкулеза, Пастеровской пипеткойнабирают культуру Л-форм с модифицированной срецы Нкольниковой и заправляют стерильный шприц. После чегоскорлупу яйца с эмбрионом над воздушным пространством обрабатываютспиртом, в центре его прокалывают 20отверстие и прозводят заражение 0,10,2 мл в желточный мешок, расположенный с противоположной стороны отзародыша. Затем отверстие в скорлупезаливают парафином и зараженные эмбрионы помещают в термостат с температурой 35-37 С и влажностью 60-657,По истечении одних суток отверстиенад воздушной камерой вскрывают,. пастеровской пипеткой набирают частьжелтка для приготовления мазков иокраски их по Циль-Нильсену,. а также высева на питательные среды Левенштейна-Иенсена, Этим же желткомзаражают свежие 7-дневные эмбрионы,в той же дозе. И так в последующемдо получения реверсии, которая наступает, начиная с 3-4-го пассажа. Обнаруживают ее в окрашенных мазках,где выявляются кислотоустойчивые палочки. Рост типичных колоний возбудителя появляется на 12-14-е суткив зависимости от вида микобактерййтуберкулеза,П р и м е р 1, Взята культураЛ-форм микобактерий, выращенная наполужидкой среде Школьниковой в модификации И. Р. Дорожковой, выделеннаяиз материала от животных. При фазовоконтрастной микроскопии нативных препаратов обнаружены микроструктурныеэлементы Л-форм в виде скоплений сферических вакуолизированных элементов,шаровидных тЕл и однородной зернистоймассы, С целью получения реверсии вжелточный мешок 7-дневных куриныхэмбрионов вводят 01-0,2 мл Л-культуры. Заражение и пассаж производятпо описанной методике. Через суткииз желтка зараженного эмбриона готовят препарат и окрашивают по методуЦиль-Нильсена. Микроскопия препарата показывает наличие скоплений сферических вакуолизированных элементови зернистых масс, окрашенных в синийцвет, При микроскопии мазка,:приготовленного из желтка эмбриона 2-го пассажа, просматриваются некислотоустойчивые папочки различных размеров и форм, Встречаются также и скопления сферических элементов, Микроскопией мазка из эмбриона 3-го пассажа устанавливают наличие отдельных кислотоустойчивых палочек в смеси с некислотоустойчивыми. В препаратах 4-го пассажа кислотоустойчивость хорошо выражена. Из желтка этого эмбриона производят высевы на среду ЛевенштейнаИенсена и через 14 сут наблюдают рост типичных колоний микобактерий,П р и м е р 2. Культурой Л-форм микобактерий, выделенной из лимфатических узлов крупного рогатого скота., заражен 7-цневный куриный, эмбрион, В окрашенных препаратах первого пассажа просматривают кислотоустойчивую зернистую массу и скопления шаровидных тел, окрашенных в синий цвет.При микроскопии препарата из эмбриона 2-гс пассажа наряду с кисло:оус точивой зернистой массой обнаруживают некислстоустойчивые нити. При 3-м пассаже обнаружены кислотоустойчивые палочки и нити в смеси с некислотоустойчивыми. При 4-м пассаже установлено наличие кислотоустойчивых бактерий. При посеве желтка из эмбриона.4-го пассажа на 20 - е сутки получен рост типичных колоний микобяктерий иа пло.ньг средах. Испсльзовяние изобретения позволяет ускорить сроки получения ревертантов Л-форм микобактерий туберкулеза,