Способ получения гонадотропного препарата “гравотадж

СОЮЗ СОВЕТСКИХссссссСссссссесРЕСПУБЛИК 4 П 1), ЗЩ) А 61,К 37/3 ЕННЫЙ КОМИЗОБРЕТЕНИ ССС ОТРЫТИЯ: сс двсОсссс 0 мсс ссссдесссссстВсс сс с в оват во ССС1975о СССР4,(21) 2931465/30 1522) 2702. 80.осаждение гормонального вещества изсыворотки крови жеребных кобыл этиловым спиртом и отделение балластныхбелков, о т л и ч а в щ и й с ятем, что, с целью упрощения и позы, Р. щения эффективности способа, гормо;.нальное вещество:после его осаждения смаававт с 0,28-0,323-ным ра-,створом агара и затем денатурирувтэтиловым спиртом.ВИзобретение относится к ветеринарии, в частности к способам получения концентрата гонадотропных гормо.нов, обладающих фолликулостимулирующим действием.Известен способ получения препарата гонадотропинов из сывороткижеребных кобыл (СЖК), включающий последовательное осаждение балластных:белков растворэм риванола и охлажден.ным ацетоном, выделение препаратаацетоном, выдерживание смеси в течение 30-60 мин при комнатной температуре, промывку и лиофилизацию 1).Недостаток этого способа - загрязнение препарата риванолом.Известен способ получения,гонадотропного препарата, который преду"сматривает фракционное,осаждениес помощью 9 А-ного спирта в кислойсреде. Сначала осаждают балластныебелки при концентрации растворителей 20-50 с последующей промывкой,затем из насадочной,жидкости осаждают активное вещество при концентрации спирта 70-80. Полученный осадок лиофилизируют, а затемцодверга"ют очистке, экстрагируя его водой,обессоливая Фильтрацией через молекулярные сита и повторно обрабатываяпервую Фракцию органическими "раство"рителями, Фильтрацию производят пропусканием раствора через колонкунаполненную сефадексом Ги уравновешенную водой 2Этот способ является сложным инедостаточно эффективным. Сложностьспособа обусловлена ступенчатостьюочистки и применением на одной изступеней молекулярных сит, Это требует постоянного контроля за свойствами сефадекса при уравновешиванииводой. Усложненность схемы очисткиприводит к, удорожанию препаратаи ограничивает воэможность его массового производства для примененияв сельскохозяйственной практике. Ктому же высокая степень очисткине только нерентабельна, но и нецелесообразна, так как эффективностьпрепарата не зависит от степениочистки,Недостаточно высокая эффективность известного способа связана спотерей активности препарата при промывке осадка балластных белков засчет их растворения и при лиофилизации, хранении и растворении в воде осадка активного вещества за счетего деструкции.Цель изобретения - упрощение иповышение эФфективности способа.Поставленная цель достигаетсятемчто гормональное вещество послеего осаждения смешивают с 0,28-8,32 ным раствором агара и затей денатуриру зтиловым спиртом.П ри м е р 1. 1 л СЖК с актиав1 О костью 280. мыш.ед./мл подкисляют дадяной уксусной или карболовой кислЬтой до рН 4,0-4,5 и добавляют кнему при помешивании 1 л 96 ф-ного эти"лового спирта, охлажденного до 4 оС.15 Полученную суспеизию оставляют приэтой температуре на 12-14 ч, затемосадок балластных белков отделяютцентрифугированием и отбрасывают.Незначительным содержанием активного2 О вещества в осадке можно пренебречь.К холодному центрифугату (фильтрату)добавляют 4 л охлажденного до 4 С96 о-ного этилового спирта и сновавыдерживают при этой температуре25 12-14 ч. При этом в осадок выпадаетискомое гормональное вещество, которое отделяют, а надосадок отбрасывают. Осадок немедленно растворяютпри помешивании 0,30-ным воднымраствором агара, имеющим температуру 35-360 СР и доводят общий Объемдо 58 мп. Полученный раствор доводятдо 100 мл холодным 96 о-ным спиртомпри быстром перемешивании и последующем встряхивании. Полученный препаратвыдерживают при 4 С в течение 24 ч.несколько раз взбалтывают, после чего он может храниться беэ дополнительной консервации при 15-20 оС длительное .время - около года, не теряя4 О активности,Проверка активности препаратов,полученных известным и предлагаеваамспособами, проводится на белых ьишах. При этом 1 мл чистого гормо 45 напьного вещества растворяют в первом случае в дистиллированной стерильной воде, во втором - в смеси58 мл 0,3-ного водного раствораагара и 42 мл 96 о-ного спирта.5 ОВ таблицеприведены результатыпроверки известного и предлагаемогопрепаратов. Знак (+) означает поло.жительную реакцию, знак (-) - отри 55 цательную, э.нак (+) - сомнительнуюреакцию жпаи.:3 29,Применение предлагае позволяет снизить эффек с 9 миа.ед., как в иэве до б ьыа.ед/кг массы тел Препарат не проявляет а кнх признаков.мого способа ивную дозу тном способе, а животного, афилактичесСоставитель А. ФилипповаРедактор А. Козориз Техред И, Гайду Корректор Ю.Иакаренк 5/6 Тираж 711 ВНИИПИ Государственного по делам изобретений 133035, Иосква, Ж, Раушаказ 28 сноеССР д, 4 Филиал ППП "Патентф, г. Ужгоро роектна Активность нзвестсоставляет 140-145лагаемого - 170-175Таким образом, преный предложенным спостивность на 12 боль ого препарата ваш.ед/мл,предьыш.ед/мл.парат, получен обом, имеет ак шую, чем известны Под комитета открыти ская наб