Способ тестирования тератогенной активности химических веществ

Союз СоветскихСоциалистическиРеспублик ОЛ ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ 8 У оц 938946ао делам неебретеннй н вткрытнй(54) СПОСОБ ТЕСТИРОВАНИЯ ТЕРАТОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ 20 Изобретение относится к медицине, аименно к способу тестирования тератогенной активности факторов внешней среды хи.мической природы (в том числе и лекарственных препаратов).Известен способ тестирования тератогенной . активности химических веществ, основанныйна введении испытуемого вещества животнымв разные сроки беременности без допол.нительной нагрузки 1).Недостатком известного способа тестирования является то, что в ряде случаев не удается определить тератогенную активность у потенциальных тератогенных препаратов, так как они еюобладают в больших дозах, либо она проявляется в определенных условиях (например, нарушенное состояние материнского организма часто наблюдающееся у больныхбеременных женшин).Цель изобретения - повышение точности способа, а также одновременное вынвление тератогенных и эмбиотоксических свойств химических веществ. Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа тестирования тератогенной активности химических веществ путем введения исследуемых веществ интактным беременным животным тестирование проводят на фоне алкогольной нагрузки, при этом в течение периода эмбриогенеза животным внут. рижелудочно вводят этиловый спирт за 30 - 60 мин доя воздействия испытуемого химичес. кого вещества.Способ осуществляют следующим образом.Беременным животным (крысам) в течение нескольких дней (с 1 - 10 по 13-й нли с 10.го по 13-й день беременности) до введения испытуемого ветцества вводят этиловый спирт в количестве 1 мл в виде 20%-ного водного раствора внутрижелудочно. Затем многократно или однократно в соответствующие сроки внутриутробного развития этим же беременным животным вводят испытуемое вещество, применяя необходимый способ введения. Учет результатов влияния испытуемого фактора на внутриутробное развитие производят в концеФормула изобретенияСпособ тестирования тератогенной актив.ности химических веществ путем введения исследуемых веществ интактным беременнымживотным, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, а также одновременного выявления эмбриотоксических свойств химических веществ, тести. рование проводят на фоне алкогольной нагрузки, при этом в течение периода эмбриогенеза животным внутрижелудочно вводят этиловый спирт за 30 - 60 мин до воздействия испытуемого химического вещества.Источники информациипринятые во внимание при экспертизе1. Методы экспериментального исследования по установлению порогов действия про. мыщленных ядов на генеративную функцию с целью гигиенического нормирования. М., МЗ СССР, 1977.714 Подписноеи ул.Паек гная. 4 50 3 93894периода беременности или в соответствующиесроки постнатальной жизни,П р и м е р . Исследовали влияние хлоридина (2,4-диамин -5-п.хлор.6-этилпиримидина),адреналина, тио ТЭФа и 2-меркаптобензимидазола на внутриутробное развитие крыс.Хлоридин вводят внутрижелудочно в дозе25 мк/кг внутрибрюшинно на 13-й день беременности (первым днем беременности считаютдень обнаружения спермиев во влагалищных 1 Омазках после подсадки самок к самцам) 2 -меркаптобензимидазол в дозе 30 мг/кг вво.дят внутрижелудочно с 1 О по 13 день бе.ременности. Учет результатов влияния указанных препаратов производят на 20-й день беременности с использование общепринятых тератологических методик.В результате проведения опытов былоустановлено, что хлоридин и адреналин виспытуемых дозах не оказывают влияния наэмбриогенез, тиоТЭФ обладает слабым терато.генным действием: у 8,4% зародышей отмечены аномалии развития скелета и внутренных органов. Введение 2-меркаптобензимидазола в течение нескольких дней органогенеза не обуславливало тератогенного его действия, однако приводит к повышению числапогибающих на постимплантационных стади.ях развития зародышей (26,4%),Таким образом, использование общеприня 30той методики тестирования тератогенной активности позволяет выявить слабый тератогенный эффект лишь у тиоТЭФа, в то жевремя хлоридин, адреналин и 2.меркаптобензимидазол при такой постановке опытов вуказанных дозах тератогенным действием необладают.В связи с этим возникает задача прове.рить наличие тератогенных свойств у испытуемых препаратов при предварительной алкогольной нагрузке. Этанол в виде водного40раствора (20%-го в объеме 1 мл вводят с1-го по 13-й день беременности) в случаеисследования тератогенных свойств 2-меркап.тобенэимидаэола) или с 10-го по 13-й деньбеременности (при исследовании остальныхпрепаратов). Спустя 30-. 60 мин после введения эталона вводили испытуемые препараты в указанных выше дозах и в соответствующие срокибеременности. Учет результатов производятаналогично как и в предыдущей серии (па20.й день беременности).Как показали результаты исследований, хлоридин в этих условиях обусловил возникновение аномалий развития у 40,8% эмбрионов,, причем уродства разви 1 ия были типичными удчя лей вил лаппого препарата в большихВНИИПИ Заказ 4524/10 ТиражФилиал 11 ПП "Патент", ю Усгоргъ 6 4лозах (50 мг/кг): фокамелия, микроцефа. лия, экзофтальмия, гипо- и агнатия, экстродактилия, гидроцефалия, гидронефроз и др. ТиоТЭФ на фоне алкогольной нагрузки вызывает аномалии конечностей и черепа у 33,80 плодов крыс, что в 4 раза больше по сравнению с действием одного тиоТЭФа, причем аномалии развития значительно сильнее выра. жены. Адреналин обусловил тератогенный эффект у 21,7% эмбрионов, причем следует отметить что при алкогольной нагрузке адреналин вызывает грубые аномалии черепа, костей грудины, ребер и др. 2.меркаптобенэимидаэол на фоне алкогольной нагрузки вызывает уродства развития внутренних органов и скелета у 33,8% плодов.Следует подчеркнуть, что введение одного этилового спирта в объеме 1 мл с 1-го по 13-й день беременности не оказывает повреждающего действия на эмбриогенеэ: уровень постим плантационной гибели зародышей (7,0 - 2,5%) не превышает контрольный уровень, ни у одного из 93 зародышей не от. мечено аномалий развития, Аналогично воздействие этанола с 10.го по 13-й день бере. менности в приведенной выше дозе не оказывает тератогенной и эмбриотоксический эффект.Таким образом, предварительная нагрузка этиловым спиртом с 1-го по 13-й или с 10-го по 13 й дни беременности в нетоксичес. кой для зародышей крыс дозе значительно усиливает тератогенные и эмбриотоксические свойства химических веществ и повышает эффективность выявления этих свойств у химических агентов в малых дозах, в кото. рых у интактных животных они не обладают таким действием.