Способ сенсибилизации белковых частиц

публикова 8.02.82. Бктллетень тт 8 3) УДК 611- -01 8,51 (088,8) Дата опубликования оп аиня 28.02,82аучно-исследовательский институт по бпологиче имтТспытаниялт химических соединентТй 7) Заяин) СОСОГ СЕ)СИГэИЛИЗАЕ 1 ИИ ЕэГЛКОЕЗтХ ЧАСТИ 1 Однако ет новьс стиц. Цель иышетпте устойвости каз анн способ сепг осу цествля циотТНТкпос при р 7,0 белкетх чИзобретение относится к лТедТтпине и биологии и может быть использовано для иммунохимпчослих методов выявлении антител к барбитуратам реакцией торможения пассивной гемагглкттннацип определения низких концентраций барбитуратов в биологических жидкостях, а также для изучения фармакодинамики лекарственных препаратов ряда барбитуратовой кислоты,Известен способ сенсибилизации белковых частиц путем их инкубации с реО акциоттно-способным производным гаптена при р 7,0-9,0 и СОС 11 .известный способ не позволяить устойчивость белковых ча 5 обретении - повковых частиц,ая цель достигается тем, чтоибТТли;.тацит белковых частицют путем их пнкубации с реакбным Тт)опзтоднттл гаптена-0,0 и 0-10 С, в качествептиц нсТТоТТьз ют эритроциты,а в качестве реакционноспособных производных гаптена - диазониевую соль п-аминодифенилазоморфина, диазоноевуюсоль п-амннодифенилазоаминазина хлорфорлеиат 5-(1-метилбутил)-5- (2-окси пропил)-барбитуровой кислоты или диазониевую соль 5-этил-( лт-амино-женил)-барбитурокой кислоты в соотноцппи соответственно 4 10 -8.10 41,5 к,0 , 4 0.10 810 510 - 8 10 на 1, 8 10 эритроцитова инкубацию проводят в забуференномтрис-буфером изоосматическом физиологическом растворе,П р и м е р 1. К суспензии 1 млто100",4-ных эритроцитоп барана (1 8 10клеток) в 40 лтл трис-буфера (0,02 Мтрис, 0,15 М хлористый натрий, р 1 88,5) добавляют прн 0-10 С 0,1 мг(4 10 4 ммоля) диазониевой соли 5-этТтл-( м-аминофс ил)- бар бисерово й кислоты, поддерживая р 8,0-8,5 добавлением 0,14 М раствора гидроокиси натрия.еанлонную массу птТкубируют при О 3 Г 10 Г 03 10 фС в течение 1 ч, Сенсибплпзированные эритроциты отмывают цонтрифугированием несколько ра трис-буфером до получения прозра щого нс окрашенного супернатанта и хранят в видс 2,57-ной суспензии в растворе, содержашем нв 1 объем нормальной декомплементирэванной кроличьей сыворотки 74 объема раствора, приготовленного из расчета 100 ммолей глюкозы, 80 ммолей хло- с 0 ристого калия и 20 ммолей двузамещенного фосфата натрия на 1 л дистиллированной воды, причем рН этого раствора доводят до 8,0-8,5 добавлением 1 М раствора соляной кислоты. Устойчивость сенсибилизированных ковалентным связыванием с фенобарбиталом эритроцитов определяют визуально по появлению окраски в надосадочной жидкости. Окрашивание надосадочной жидкости наблюдают только на 8-9 после их получения.П р и м е р 2. Процесс осушествляют аналогично примеру 1, но реакцию 1,8 х М 10"Оэритроцитов проводят с 1 мг (4 х-310 ммоля) свежеприготовленного раст- д вора диазосоли 5-антил(м-аминофенил)- -барбитуровой кислоты. Устойчивость сенсибилизированных фенобарбиталом эритроцитом проводят как в примере 1. Окрашивание надосадочной жидкости не наблюда-зо ется в течение 7 дней.П р и м е р 3. Процесс осуществляют аналогично примеру 1, но реакцию 1,8 д 10"о эритроцитов барана проводят с 2 мг (8 10ммоля) диазосоли 5-етил-(м 35 -амннофенил)-барбитуровой кислоты, Окраишвание падосадочной жидкости, в которой хранят эритроциты, не наблюдают в течение 8-9 дней с момента . их приГотовления,Предлагаемый способ позволяет повысить устойчивость белковых частиц.Ф ормула изо бретенияСпособ сенсибилизации белковых частиц путем их инкубации с реакционноспособным. производным гаптена при рН 7 0 оУ90 и 0-10 С, отличаюши йсятем, что, с целью повышения устойчивости белковых частиц, в качестве белковыхчастиц используют эритроциты, а в качестве реакционноспособных производныхгаптена - диазониевую соль и-аминодифенилазоморфина, диазониевую соль и-аминодифенилазоаминазина, хлорформиат5( 1-метилбутил)-5-(2-окси-пропил)-барбитуровой кислоты или диазониевую соль5-этил-(м-амино-фен ил) -б а рб и ту ров ойкислоты в соотношении соответственно410 4 -8 10 4, 1,5.10-2,0.10 340 10 -8 10 , 4 10 - 810 налоф1,8 10 эритроцитов, а инкубацщо проводят в забуференном трио-буфером изоосматпческом физиологическом растворе.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Ковалев И. Е., Полевая О. Ю Башарова Л. А, и Байдров Б, В. "Химикофармацевтический журнал, М., 1977,М" 5,с. 13-14.Составитель С. МалютинаРедактор В. Пилипенко Техред М. Рейвес Корректор М, ДемчикЗаказ 886/69 Тираж 883 П одпис ноВНИИТТИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий1.13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ГТТТГТ "Патент, г. Ужгород, ул. Проектняя, 1