Способ разделения арилэстеразы и альбумина сыворотки крови

Союз Советски кСоциалистическиеРеспубннк ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 909634ае делен нзееретеннй н открытий(7) Заявитель Научно-исследовательский институт медицинской радиологии АМН СССР(54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ АРИЛЭСТЕРАЗЫ И АЛЬБУМИНА СЫВОРОТКИ КРОВИ Изобретение относится к медицине, а именно к способам выделения белков и ферментов методом электрофореза.Известен способ разделения арилэстеразы и альбумина сыворотки крови путем проведения электрофореза в геле 1Однако при осуществлении известного способа затруднена идентификация фракции арилэстеразы, определение ее содержания в сыворотке крови, так как фракция арилэстеразы обладает относительной электрофоретической подвижностью, близкой к подвижности альбумииа, что снижает точность получаемых результатов и не позволяет использовать электрофорез для выделения арилэстеразы в чистом виде.Цель изобретения - повышение точности способа. Указаптая цель достигается тем, чтонри осуществлении способа разделенияарнлэстеразы и . альбумина. сывороткикрови путем проведения электрофорезав геле, сыворотку предварительно эмуль 2гируют олеиновой кислотой, взятой до конечной концентрации 0,001-0,002 М.Способ осуществляется следуюшим образом.Перед электрофорезом к сывороткекрови добавляют жирную кислоту, например олеиновую, в концентрации 0,001- 0,002 М. При этом арилэстераза образует комплекс с жирной кислотой, обладаюшей более высокой электрофоретичетв ской подвижностью, чем фракция альбумнна или арилэстераза до прибавления жирной кислоты, За счет этого ярилэстераза передвигается к аноду с большей скоростью что позволяет выделять ее в первой фракции в практически чистом от других белков виде. Выявление локализации арилэстеразы на электрофореграмме и ее элюирование производят известным мето-.дом.20П р и м е р. К сыворотке крови человека добавляют олеиновую кислоту из расчета 0,5 мг/мл и тшательно перемешивают в пробирке стеклянной палочкой в те.Составитель Ю. АлмазовТехред М. ГеРгель Корректор М, Демчик Рвлактор Б. Пилипеню Заказ 886/60 Тираж 883 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. Т 5 Филиал ПТТТ "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная,3 0096 чение 4-5 мин до получения эмульсии.Пробу полученной таким образом эмап сии вносят в стартовую лунку в 1,0- 1,5 В-ом агаровом геле с мединаловым буфером рН Т 2-8,4. К электродам подключают напряжение от источника постоянного тока и проводяг электрофорез.По истечении времени, достаточного для оптимального разделения (1,0-1,2 ч) арилэстеразы и альбумина, электрофорез прекращают. От основного агарового блока, в котором проводился электрофорез, отрезают контрольную электрофореграмму и в ней выявляют локализацию фракций арилэстераз, С этой целью ее инкубируют в 0,01-0,02%-ом растворе 2-нафтилацетата с 0,03-0,04% прочного синего Б в 0,1. н,фосфатном буфере рН 7,6- 7,8, Из основной части блока агарового геля вырезают участок, соответствующий локализации арилэстеразы. Этот участок помешают в центрифужную пробирку, замораживают при 20-30 С, размораживают и центрифугируют при 1000 об/мин.Надосадочную жидкость сливают, диализуют,в целлофановом мешке против дисОтиллированной воды при 4-5 С и высушивают лиофильной сушкой. Полученный препарат арилэстеразы является практически чистым, так как при повторном электрофорезе образует одну белковую зону, обладакюцую ферментативными свойствами арилэстеразы (индекс 3,1.1.2 по Международной классификации и но 34 4менклатуре ферментов), гидролизует 2- -нафтилацетат, активируется Са угнетается тяжелыми металлами и комплексоо бразователями.Предлагаемый способ позволяет повысить точность полученных результатов за счет повьпцения электрофоретической подвижности арилэстеразы сыворотки крови при эмульгировании с олеиновой кислотой с 1,0-1,1 до 1,5-1,6 по отношению к подвижности альбумина, при этом арилэстеразу выделяют в чистом виде в первой фракции. Формула изобретения Способ разделения арилэстеразы иальбумина сыворотки крови путем проведения электрофореза в геле, о т л и ч а -ю ш и й с я тем, что, с целью повышенияточности способа, сыворотку крови предврительно эмульгируют олеиновой кислотой,взятой до конечной концентрации 0,001-Ов 002 М.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1.т.тгеГ З.СЬагасЫг 1 а 11 оо деь 1 йобпея 1 егоьеб еС доо 1 геь еМегаез.сстгЪохбтт.теэ аргеэ еГесЬт орЬогеьей 1 глюцооеВес 1 горт 1 от" е 5 е. е а еСобе.З.АРРР 1 ссйлои ц Ге.Ьобе стеб еЮеговеьс 30 5 еготю ттОмои юот щаС, Дио зи 51РачФ,еот-,ч, 101,1961, р. 104.