Способ количественного определения свободной и связанной нейраминовой кислоты в биологической пробе

Союз СоветскихСоциалистическихРеспубикиОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 898326(5) М. Кл.01 М 33/52 Воударствиаы квинтет СССР оо делам изебретений н открытей(72) Авторы изобретения Люльева и Г, И. Сименко сесоюзный научно-исследовательский институт применения гражданской авиации в народном х(7) Заявнтел 54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СВОБОДНОЙ И СВЯЗАННОЙ НЕЙРАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ В БИОЛОГИЧЕСКОЙПРОБЕ вля- Чыство в 1 ты.яется повышен 05 млОоставля В пробирку добавляютраствора периодата натри на 1 ч при комнатной те 20для отделения гемоглобин бавляют 1 мл насыщенно раствора сернокислого на руют при 6000 об/мин 1 ре. Зате а туда же д .о при 50 С трия, центрифуги мин и отделяИзобретение относится к медицине и касается исследования веществ в тканях человека и животных,Известен способ количественного определения свободной и связанной нейраминовой кислоты в биологической пробе путем гомогенизации ее с последующим отделением примесей последовательной обработкой периодатом натрия, арсенитом натрия и тиобарбетуровой кислотой, двойной экстракции циклогексаном и отделения из экстракта свободной и связанной нейраминовых кислот 11 .Однако известный способ не позволяет получить точные результаЦелью изобретения явл ие точности. способа.Эта цель достигается тем, что способ количественного определения свободной и связанной нейраминовой кислоты в биологической пробе осуществляют путем гомогенизации ее с последующим отделением примесей последовательной обработкой периодатом натрия, арсенитом натрия и тиобарбитуровой кислотой, двойной экстракции циклогексаном и отделения из экстракта свободной и связанной нейрами новых кислот. К гомогенату ткани после обработки его периодатом натрия доба ют сернокислый аммоний до полного на щения при 50 С, выпавший осадок удаля ют и последующей обработке подвергают надосадочную жидкость.П р и м е р , Определяют количе освободной и связанной нейраминовой лоты в эритроцитах. Для этого подгота ливают 2 образца гемолизата эритроцитов по 100 мг и каждый из них, ломе-ф щенный в пробирку, обрабатывают следующим образом,89832 3ют надосадочную четь от гемоглобина,выпавшего в осадок,К надосадочной части освобожденнойот гемоглобина, добавляют 0,5 мл 10%ного раствора арсенита натрия и 1,5 мл0,6 Ъ-ного раствора тиобарбитуровой кислоты, взбалтывакт и ставят в кипящуюводяную баню на 15 мин.После этого пробирки охлаждают в воде, Для проведения экстракции примесей 16в пробирку добавляют 10%-ный растворЯ аОН в количестве, обеспечивающем рН8,0 (примерно 0,4 мл) и 1 мл циклогексана, взбалтывают до получения однородного раствора, центрифугируют при6000 об/мин 5 мин и удаляют слой циклогексана, содержащий примеси. Этотпроцесс повторяют дважды.К водной фазе, освобожденной от примесей, добавляют 50%-ную ортофосфорную фОкислоту до,рН 1,9-2,0 (контроль по индикаторной бУмаге) и 0,3 мл циклогексана, встряхивают до получения однородногораствора, центрифугируют при 6000 об/мин5 мин. В полученном циклогексановомэкстракте, содержащем нейраминовую кислоту, определяют ее количество спектрофотометрически на волне 549 ммк. Оналичии в экстракте нейраминовой кислоты судят по характерной спектральнойкривой образовавшегося хромогена с максимумом поглощения на волне 549 ммк. 6 4Предлагаемый способ по сравнению с известным является более точным, Это позволяет более тонко улавливать изменения защитныхреакций клеток организма на воздействие различных патологических агентов.формула изобретенияСпособ количественного определения свободной и связанной нейраминовой кислоты в биологической пробе путем гомогенизации ее с последующим отделением примесейпоследовательной обработкой пею риодатом натрия, арсенитом натрия и тиобарбитуровой кислотой, двойной экстракции циклогексаном, отделения из экстракта свободной и связанной нейраминовых кислот, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, к гомогенату ткани после обработки его периодатом натрия добавляют серно- кислый аммоний до полного насыщения при 50 С, выпавший осадок удрляют иопоследующей обработке подвергают надосадочную жидкость.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Авторское свидетельство СССРСоставитель С. МалютинаРедактор М. Циткина Техред М. Надь Корректор Л ференцЗаказ 11939/60 Тираж 882 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий1 1 3 03 5, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/ 5ч;плелТТ "Патент",г, Ужгород, ул, Проектная, 4