Способ определения тканевой несов-местимости донора и реципиента

Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 19.06,79 (21) 278438028-13с присоединением заявки Ль -(45) Дата опубликования описания 07.05,81. Ч з 6 О 1 М 3352 Государственный комитетло делам изобретений и открытий(71) Заявитель Рижский медицинский институт(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТКАНЕВОИ НЕСОВМЕСТИМОСТИ ДОНОРА И РЕЦИПИЕНТАИзобретение относится к медицине, а именно к способам определения тканевой несовместимости донора и реципиента при пересадке органов.В настоящее время в клинике при лечении хронической почечной недостаточности широко проводят пересадку почки. Однако в ряде случаев пересадка почки бывает неудачной из-за тканевой несовместимости донора и реципиента, проявлением которой является развитие реакции отторжения.Известен способ определения тканевой несовместимости донора и реципиента, сопровождающийся реакцией сверхострого отторжения трансплантанта путем постановки лимфоцитотоксической реакции 11.Способ заключается в том, что чистую взвесь лимфоцитов донора емешивают с сывороткой реципиенга и инкубируют в течение 30 мин в термостате при 37"С, затем добавляют кроличий комплемент и опять проводят инкуоацию при тех же условиях, прибавляют раствор трипановото синего и после 15 мин выдерживания при 37 С и 30 мин при комнатной температуре микроскопируют. При наличии поврежденных лимфоцитов (окрашенных трипановым синим), констатируют присутствие в сыворотке предполагаемого реципиента анти. сетел-лимфоцитокси нов и делают вывод о несовместимости пары донор - реципиент.Недостатком этого способа является 5 то, что в ряде случаев даже при отрицательной лимфоцитотоксической реакции развивается сверхострое отторжение трансплантата.Целью изобретения является повыше- О ние точности способа.Поставленная цель достигается тем, чтов способе определения тканевой несовместимости донора и реципиента сыворотку крови реципиента наносят на срезы почки 15 донора, инкубируют их во влажной камерепри 20 - 22 С в течение 25 - 30 мин, далее на препарат наносят люминесцирующую сыворотку против глобулинов человека, проводят повторную инкубацию, затем об рабатывают ацетоном и при наличии специфического люминесцентного свечения определяют тканевую несовместимость донора и реципиента.Способ осуществляют следующим обра зом, Нефиксированный кусочек донорскойпочки за мор аживают углекиелотой или жидким азотом и приготавливают срез толщиной 4 - 10 мкм, Расправляют его на предметном стекле и фиксируют в ацетоне ЗО в течение 10 мин. Срез быстро подсуши828087 51 О сО 25 40 45 50 5 э ЯО Тираж 915 Изд,296 Заказ 3140 Подписное Загорская типографа) Упрполпграфпздата Лособлпсполко)а а)От и вг)з;ухе, наносят а СГО нсинактивиро)ннун) сыворотку предполагаемо о реципиента и инкубируют во влажной камере прп 20 22 Стечение 25 - 30 мин.Сливают со среза сыворотку, промывают его в течение 5 мин в больших объемах оды, подсушивают, наносят люмииесциру)Ощм)0 сыворотк проти глобулнов чсловека и инкуоируют во влажной камере при 2022 С в течение 25 - 30 мин. Сливают со среза сыворотку, промывают в течение 5 м)ш сюльпшх Объемах воды, обрабатывают в течение нескольких секунд ацетоном.Подсушспнь)й срез после обработки ацетоном исследуют в падающем синем свете люмипесцентиого микроскопа.Способ иллн)стрирустся следуницими примерами,Пример 1, Больной 11. И. 11., 1948 гола рождения, история болезни Ло 5038, поступил во 2-е отделение 6 марта 1978 г. для пересадки почки в связи с хропчелкой почечной недостаточностью, развившейся в результате крош)чсского гломерулонеф. рита. 1) ин 1978 г. О.),)г розведсна пересядня трупной почки, 1 имфототоксическяя ре) к)ия был отрицательной, При с)брботке ерезо до)горской ночки гю предг)ага)ех)о)у способу было выявлено специ. фичсекос евсчснис бязяльпых мсморан кяилляро кг)убочков, что указывало ня непригодность данной донорской почки рсципис)пу Г 1, 11, П, 1 за)звиз)ас), свсрхострая реакция отторжения почечного аллотрансплантата. Его функция полностью отсутствовала. 14 ию)гя 1978 г. насзупиля смерть больного.П р и м е р 2. Больной К. В. Л., 1950 года рождения, история Ло 7197 лечился во 2-м отделении по поводу ропической почечной недостаточноети в связи с хроническим пиелонефритом. Было проведено 174 сеанса экстракорпорального гемодиализа. В апреле 1977 г. была произведена первая пересадка почечного аллотр асила нтата. В июне 1977 г. было произведено удаление псрвого почечного аллотрансплантата в связи с острой реакцией отторжения.11 мая 1978 г. была произведена вторая пересадка почечного аллотрансплантата, Предлагаемым способом было выявлено паличис предсуществующих антител по спсцифичсскому свсчсншо базальных мембран капилляров донорекой почки, Однако лимфоцитотоксическая реакция была отрицательной, Функция второго почечного аллот 1 засглантаа Отс) тствовала из-зя сверх. острой реакции отторжения,Клиническая апробация, проведенная па 20 контрлатсральных донорских почках, показала, что предлагаемый способ поз. 4воляет с высокой достоверност)по и в короткий срок констатировать у предполага. емых реципиентов наличие или отсутствие прсдеуществуОщих антител, способных вызвать реакцию сверхострого отторжения исследованных донорских почек:у 15 реципиентов из 20 сыворотка крови пе содержала предсуществующих антител к антигенам донорских почек: отсутствовало специф ическое свечение в опытных криостатных срезах контрлатсральных донорских почек, и после пересадки у этих больных нс наблюдалось реакции свсрхострого отторжечия траисплан. татов;- у трех реципиентов из 20 имелись предсуществующис антитела, выяьленные лимфоцитотоксичсской реакцией и предла гасмым люминесцентным иммуноморфологическим способом, реципиентам не была произведена пересадка почек от этих до. норов;- у двух реципиентов из 20 лимфоци)отоксичсекая реакция была отрицательная, а предлагаемым люминесцентным иммуноморфологическим способом было установлено наличие предсуществующих антител сыворотке крови к антигенам контрлатсральных донорских почек. У этих ЗО двух реципиентов развилась реакция сверх- острого отторжения почечных аллотрансплантатов. Предлагаемый способ позволяет повысить точность прогнозирования развития реакции )гверхострого отторжения при пересадке почечного аллотрансплантата. Формула изобретения Способ определения тканевой нссовместимости донора и реципиента при пересадке почки путем проведения реакции между тканями реципиента и донора с последующим микроскопированием, о т л и ч аю щи йс я тем, что, с целью повышения точности способа, сыворотку крови реципиента наносят на срезы почки донора, инкубируют их во влажной камере при 20- - 22 С в течение 25 - 30 мин, далее на препарат наноеят люминесцирующую сыворотку против глобулинов человека, проводят повторную инкубацию, затем обрабатывают ацетоном и при наличии специфического люминесцентного свечения определяют тканевую несовместимость донора и рспиписнта. Источники информации,принятые во внимание при экепертизе1. Зарецкая Ю. М. и др. Иммунологичсскис аспекты аллотрансплантации. М., 1974, с. 156 - 194.