Способ получения литических ферментов

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ои 749890 Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 230378 (21) 2595302/28-13 (51) М. Кл. С 12 0 13/10 с присоединением заявки йо(23) Приоритет Государственный комитет СССР по дедам изобретений и открытийОпубликовано 28,0780, Бюллетень Йо 27 Дата опубликования описания 300780(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИТИЧЕСКИХФЕРМЕНТОВ Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения литических ферментов из бактерий.Известен способ получения литических ферментов путем глубинного культивирования бактерий рода Вас Ртцс на питательной среде, содержащей органический источник углерода, а также источники азота, фосфора и минеральные соли 11 .Недостатком известного способа является невысокая литическая активность ферментов,целью изобретения является повышение активности ферментов. Это достигается тем, что культуральную жидкость за 2-б ч до окончания ферментации разбавляютв 1,5-2,5 20 раза добавлением водопроводной воды или раствора минеральных солей, входящих в состав питательной среды.Способ осуществляют следующим образом.25Микроорганизмы из рода Вас Фуроа культивируют на питательной среде, содержащей органический источник углерода, а также источники азота, фосФора и минеральные соли, Суммарная 30 концентрация источников углерода и азота должна составлять не менее 2 и В период активного синтеза литических ферментов за 2-6 ч до окончания культивирования объем культуральной жидкости увеличивают в 1,5-2,5 раза путем введения стерильных растворов минеральных солей или водопроводной воды. Оптимальный состав и количество разбавляющего раствора зависят от состава питательной среды и степени ее обеднения к моменту начала активного синтеза литических ферментов.Солевые растворы, используемые для увеличения объема культуральной жидкости, могут содержать все компоненты минерального состава основной среды или часть их, например только соли одновалентных катионов или только соли двухвалентных катионов. Все компоненты минерального состава среды, кроме неорганического источника азота, могут быть взяты в тех же концентрациях, что в основной питательной среде, а неорганический источник азота - в конЦентрации в 2-3 раза более низкой, чем в основной питательной среде.Обеднение питательной среды путем увеличения ее объема за счет компонен.,ечкккнкк 3""= " - 749890 10 15 2 О 30 40 Формула изобретения ГЦНИИПИ Заказ 4556/19 Тираж 522 Подписное Фнлнал ННН Пртннт, г. нагорел, ул, Проектнан,егоЪ =Оке"сбдержащих органических ис" точников питания, приводит к интенсификации биосинтеза литических ферментов и значительному повышениюсуммарной активности синтезированных литических ферментов,П р и м е р 1, Контроль.400 л питательной среды, приготовленной по известному способу, содержащей (НН) НР 04, КСВ, М 960 . 7 Н О,СаЮ сухйе пивные дрожжи и осахарен 1ный ячменный солод в качестве источника углерода, помещают в ферментеремкостью 1500 л, засевают водной суспензией культуры В,ьоЬ( 1( 797, выращенной на ломтях картофеля. Ферментацию ведут в течение 16 ч при температуре 36-38 , постоянном перемешивании и аэрации 0,5 объем/об.мин. Поокончании ферментации активность литических ферментов составила12 700 ед. ЛА/мл, Суммарная активность 50,8 108 едЛА,Опыт.Культивирование ведут в тех жеусловиях, что в контроле.Через 9 ч после засева среды вферментер добавляют стерильный раствор 0,8 кг (МН 4) НР 04 и 0,24 кг КСв 400 л водопроводной воды. Ферментацию закончат через 15 ч после засева среды. Литическая активностькультуральной жидкости составит18500 ед. ЛА/мл. Полученнаясуммар 6ная активность составит 148 10 ед,ЛА, что в 2,9 раза вышет чем в конт: кероле","П р и м е р 2. 12 г сухого ферментативного гидролизата дрожжейБВКт 8 г лактозы, 4 г (НН 4) НР 04".Г"О, б г КСЮ, 0,1 г СаСРи 0,1 г МВВС 4)7 Н 0 растворяют в 1 л водопроводнойводы, устанавливают рН 7,2 и разливают среду по 100 мл в колбы емкостью 750 мл. Среду стерилиэуют 1 чпри 0,5 атм и после охлаждения засевают водной суспенэией культурыВ.оЬ 11 6 797, выращенной в пробирке на скошенном сусло-пептбнном агаре. Колбы ставят на качалку со скоростью вращения 160 об/мин. Культивирование проводят при 38 С.о5 контрольныХ колб снимают с качалки через 16 ч после засева среды.Средняя литическая активность составила 2.6.700 ед. ЛА/мл.В 5 опытных колбах через 10 ч пос"ле засева. среды вносят дополнительнопо 100 Кй стерильного водного раствора, содержащего в г/л: (кн 4)1 нРО 4- 2,КСС - 0,6, СаСС - 0,1, М 9504-7 Н 10 - 0,1 при рН 7,0. Ферментацитна прекращают, как и в контрольном варианте, через 16 ч после засева среды. Литическая активность культуральной жидкости составит 25.300 еч.ЛА/мл.Суммарная активность литических Ферментов в пересчете на 1 колбу составит в контроле 2,67,10 6 ед, ЛА, вопытном варианте 50,6 106 ед, ЛА илив 1,9, раза больше,П р и м е р 3. В колбы емкостью750 мл, содержащие по 100 мл стерильной питательной среды, описанной впримере 2, вносят- водную суспензиюкультуры Вас РОца ееьепйегсоь 66,выращенную в пробирке на Скошенномсусло-пептонном агаре. Культивирование проводят накачалке со скоростьювращения 160 об/мин при температуре 40 С.5 контрольных колб снимают с качалки через 16 ч после засева среды.Средняя лйтическая активность составила"3200 ед. ЛА/мл,В 5 опытных колбах через 14 ч послезасева среды вносят дополнительнопо 150 мл стерильной водопроводнойводы. Ферментацию закончат через 16 чпосле засева среды. Средняя литическая активность составит 2400 ед.ЛА/мл.Суммарйая активность литическихферментов в пересчете на 1 колбу составит в контроле 0,32 10 ед, ЛА, в6опытном варианте 0,60 10 ед. ЛА, или6в 1,87 раза больше.Данный способ получения литических ферментов позволяет увеличить активность литических ферментов беэ дополнительткйых"-затрат на органическиеисточники углерода и без продлениясрока культивирования продуцентов,Способ "получения литических Ферментов путем глубинного культивирования бактерий рода Вас 113 ц на питательной среде, содержащей органический источник углерода, а также источники азота, Фосфора и минеральныесоли, о т л и ч а ю щ и й с я тем,чтос целью повышения активностигферментов, культуральную жидкостьза 2-бчдо окончания Ферментацииразбавляют в 1,5-2,5 раза добавлением водопроводной воды или растворамйнеральных солей, входящих в составпитательной среды.Источники информации,принятые "во вйймакниепри экспертизе1. Авторское свидетельство СССРР 415294, кл, С 12 0 13/10, 1972.