Способ получения ингибитора люциферазы
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Текст
(23) Приоритет ао делен нэабретеннй н открытийОпубликовано 25.06.80. Бюллетень Лт 23 Дата опубликования описания 27.06.80(72) Авторы изобретения Г. А, Кратасюк, В. А, Кратасюк, А. Н.,Шендеров и А. М. фиш Институт физики им. Л. В. Киренского Сибирского отделения АН СССР(54) СПОСОБ ПСЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРА ЛИЦ ИфЕ РАЗЫИзобретение относится к области биохимии.Предложенный способ является новым, в патентной и научно-технической литературе не описан.5Целью изобретения является получение ингибитора люциферазы.Эта цель достигается тем, что биомассу. клеток светящихся бактерий Рпосо)ос 1 Егйтпразрущают, отделяют водорастто воримую фракцию, подвергают ее гель- фильтрации на биогеле .с диапазоном деления по молекулярному весу 800-4000. дальтон при скорости элюции 2-4 мл/смй за 1 ч, далее элюат. очищают на ДЭАЭ целлюлозе и получают целевой продукт.П р и м е р. 5 г сырой биомассы РЬО 1 оЬстсте.цю р, суспендируют в 30 мл бидистиллированной воды, содержащей этилендиаминтетраацетат 10 фм и дитиотрейтол 10 М, Полученную суспензию-Д.перемешивают с помощью магнитной мьо шалки в течение 20 ч при 4 С. За- тем центрируют 1 ч при 15000 об/мин. Надосадочную жидкость хроматографируют на колонке размером 2,5 х 50 см, заполненной биогелем Р 4(диапазон деления данного биогеля по молекулярному весу 800-4000 дальтон), Уравновешивание колонки и элюцию образца осуществляют фосфатным буфером (0,05 М, рН 6,2), Скорость элюции 3 мл/см в час или с учетом сечения колонки 15 мл/ч. Скорость элюции в разных опытах может варьировать в пределах 2-4 мл/см в час,22 Уменьшение скорости элюции ниже 2 мл/см в час нецелесообразно, так как это увеличивает время опыта.Увеличение скорости элюции .выше 4 мл/см в час приводит к уменьшению разрешающей способности колонки и фракция ингибитора не отделяется от побочных загрязняющих фракций.фракцию ингибитора, выходяэцую с колонки в объеме от 200 до 250 мл, собирают и концентрируют до 15 мл с помощью диализа на ВО- Г 1 ЪЕ.-,20, ВеаКе) (ЪсИОд, США) против 15% ного раство4вания 1,28 10 Ь, Очщиенньй препл 11 ат ингибитора при электрофорезе выявляет -ся в виде одной узкой полосы.Предлагаемый способ позволяет получить ингибитор люциферазы, который можетнайти применение для определения микроколичеств веществ, таких как аденозитрифосфат, нпотинадениндинуклеотид, флавинмононуклеотид, при определении многих 10 патологий. формула изобретени я Способ получения ингибитора люци феразы, заключающийся в том, что биомассу клеток светящихся бактерий РЬо 1 оЬоАйИощ разрушают, отделяют водорастворимую фракцию, подвергают ее гельфильтрации на биогеле с диапазоном де ления по молекулярному весу 8004000 дальтон при скорости элюции2-4 мл/см в час, далее элюат очищаютна ДЭАЭ-целлюлозе и получают целевойпродукт,3741858ра хлористого кальция, Полученный раствор хроматографируют на колонке разме -ром 2,5 КЗО см, заполненной ДЭЛЭцеллюлозой, 1(олонку уравновешиваютфосфатным буфером (0,05 М, рИ 6,2).Скорость элюции 3 мл/см в час (сучетом сечения колонки 15 мл-ч),Элюцию образца проводят линейным градиентом концентрации фосфатного буфера.-Ингибитор выходит в объеме элюата от330 до 400 мл. В результате получаем70 мл раствора, содержащего 1280 единиц ингибитора,Очищенный ингибитор имеет следующийэлементный состав,%: водород 1,5;углерод 1,5, фосфор + кислород 97.Эти данные характеризуют ингибитор каквещество полифосфатной природы.Молекулярный вес, определенный поданным гель-фильтрации, составляет890 .ф 23. Кинематически ингибитор ведетсебя как конкурентный ингибитор по одному из субстратов люциферазы - алифатическому альдегиду, константа ингибиро Составитель С, МалютинаРедактор П. Горькова Техрел М. Петко Корректор М. ПожоЗаказ 3342/2 Тираж 673 Подписное ЦИИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная,
СмотретьЗаявка
2513151, 01.09.1977
ИНСТИТУТ ФИЗИКИ ИМ. Л. В. КИРЕНСКОГО СИБИРСКОГО ОТДЕЛЕНИЯ АН СССР
КРАТАСЮК ГЕОРГИЙ АЛЕКСЕЕВИЧ, КРАТАСЮК ВАЛЕНТИНА АЛЕКСАНДРОВНА, ШЕНДЕРОВ АЛЕКСАНДР НИКОЛАЕВИЧ, ФИШ АБРАМ МИХАЙЛОВИЧ
МПК / Метки
МПК: A61B 10/00, A61K 38/55
Метки: ингибитора, люциферазы
Опубликовано: 25.06.1980
Код ссылки
<a href="https://patents.su/2-741858-sposob-polucheniya-ingibitora-lyuciferazy.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения ингибитора люциферазы</a>
Предыдущий патент: Электрод для измерения потенциалов в полости рта
Следующий патент: Способ диагностики предиабета
Случайный патент: Грифель для письма рельефными точками