Способ получения реагента для типирования антигенов эритроцитов

(ГОСПАТЕНТ СССР) ИЕ ИЗОБРЕТЕНИСВИДЕТЕЛЬСТВУ ОПИСАК АВТОРСК 1 :;. :,.:, . 2(21) 4858031/14 ., р 7) Использование изобре ения для попучения реа- (22) 08.ц 8.90,:.гентов,используемых дл)( типйрования антиге- (46)15,12.92. Бюл. %46 .снов эритроцитОв. Цель; повышение выхода (71) Ленинградский научно-исследователь- целевого йродлукта и упрочщейие способа. ский институт гематологии и переливания Сущность изобретения; фруглумин А и В; крови и Ленинградский научно-исследова- выделенный из слизистой желудков животельский институт эпидемиологии и микро- тных, иммобилизуютнацианбромактивиробиологйи им. Пастера - "ванной агарозе. После иммобилизации (72) К,Н.Климова; А.Б.Жербрун, А.А.Раки- " сорбент помешают, в колонку и проводят тянская, Н,В.Минеева, М,А.Матвеева и сорбцию антител из сыворотки со скоро- Г.Ф.Быстрова . : "." ", стью 50 мл/ч см 2. Элюцию антител с колон- (56) ВосЫп). Ворпуз; асса, 1974,263, МЗ, р. ки осуществляют цчитратнто-фосфатным .567-574, . буферным раствором при рН 2,0-2,5 и ско-(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕАГЕНТА ДЛЯ рости 10 мл/ч см Положительный эффект: ТИПИРОВАНИЯ АНТИГЕНОВ ЭРИТРОЦИ- способ позволяетувеличить выход целевого ТОВ: .;:. - продукта и упростить способ.Ю Изобретение относится к медицийе иОписанный метод имеет ряд существенкасаетсяспособовполученияреагентов,ис- ных недостатков: 1, В качестве активных апользуемых для типирования внтигенов : центров сорбента используют А и В антигеэритроцитов; л т:. :., : ны человека, при взаимодействии с антите- (рлами образуется сильная ковалентная рРеагенты для определения групп кровисвязь; выход конечнчого продукта после сор- рвозможно готовить из фракций антител, вы-бции низок (до 10от исходной). 2, Элюделенных из цельных сывороток методом . цию антител осуществляют только. приаффинной хроматографии. Очищенный ан . использований хаотропных ионов(трифлуотигены А и В, выделенные из кисты яичника роацетата), что оказывает отрицательноечеловека, иммобилиауют на Сефааоле 2 В аоадейстаие на очищенные антитела, сни.активированной бромцианом. Через колон- жая их стабильность.ку с антигеном пропускают сырье АВЩ спе-Цель изобретения; повышение выходацифичности и сорбируют соответствующие целевого продукта и упрощение способа егоантитела. Элюцию антител осуществляют . получения,трифлуороацетатом вфосфатном буферном Укаэанная цель достигается путем аф растворе (рН 7,2-7,4). Полученные фракции финной хроматографии АВО сырья на агароантител стабилизируют путемдиализа в те- зе, активированной бромцианом,чение 18 часов против Ф БР (рН 7.2) с добав- коньюгированной с антигенами А и В-подолением хлорида натрия., бными животного происхождения при сорб-.1780756 Составитель М.МатвееваТехред М,Моргентал Корректор Л.Ливринц Редактор Заказ 4229 ТиражПодписное ВНИИПИ Государственного комитета.по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 3ции антител со скоростью 50 мл/ч х см иэлюции их цитратно-фосфатным буфернымраствором(рН 2,0-2,5) со скоростью 10 мл/чхсм.Предлагаемый способ фракционирова. ния осуществляется следующим образом:выделяют фруглумин А и В путем ферментативного переваривания слизистых желудков свиньи и лошади. Иммобилизуютантигены на цианбромактивированной агарозе, для чего агарозу суспендируют"в"рас-творе СИВг и смесь уравновешивают втечение 10 мин, в процессе активации рНподдерживают на уровне 11,0 добавлениемЗМ гидроокиси натрия, Активированный 15гель немедленно отмывают дистиллирован-нойводой, затем 0,5 М раствором МаНСОзпри рН 8,5. А и В вещество в концентрации: торной мешалке в течение 18 ч . Аминокарбонатн"ые группы блокируют 0,5 Мраствором глицина на ФБР. Для оцейки эффективности связывайия антигенов с йосителем контролируют концентрацию белка висхОдном растворе антигена и во всех пробах промывной жидкости, полученных впроцессе иммобилизации. После йммобилизации сорбент помещают в колонку, Объ-ем колонки составляет 8 ммз, объем "сорбента -1 мм . Иммуносорбент использузют многократно (10-20 раз) без потери спе-цифической активности для сорбциисоответствующих антител из сырья, объем"которого в 10 раз превышает объем сорбен-.та. Оптимально проводить сорбцию антител 35из сыворотки со скоростью 40-60 мл/ч хсмг, Элюцию антител с колонки осуществляют цитратно-фосфатным буферным раствором при рН 2,0-2,5 и скорости 7-12 мл/ч хПримеры конкретного осуществленияспособа:.П р и м е р 1, В матерйалах 3 аявки; где "скорость сорбции -50 мл/часхсм, скоростьгэлюции - 10 мл/ч хсм .-45 П р и м е р 2. Получали фракцию анти - В айтител из гипериммунйой сыворотки крови барана, иммуййзированного эритроцитами: человека группы крови В,.Титр антител в 50 исходном сырье составлял: анти-В - 1:1024, гетероантител - 1: 256, Объем сывозротки - 10 мл, объем сорбента - 1 мм . Колонку с сорбентом промывали 10 объемами Ф БР (рН 7,2), затем пропускали сыворотку со скоростью 40 мл/ч х смЭлюцию сорбированных антител проводили ЦФБ (рН 2,5) со скоростью 7 мл/час х смг Объем фракций сорбировнных антител составлял 2 мл, Фракции нейтрализовали 0,5 н раствором гидроокиси натрия. Титр специфических антител составлял 1.: 1024-1: 2048. Гетероантитела в полученных фракциях отсутствовалиП р и м е р 3:, Получали фракцию анти-А антител из гипериммунной сыворотки крови кролика; иммунизированного эритроцитами человека группы А. Титр антител в исходном сырье-составлял: анти - А 1: 2048, гетероантител - 1: 1024. Обем сыворотки был равен 10 мл, объем сорбента - 1 мм. Колонку с сорбентом промывали 10 объемами Ф БР (рН 7,2); затем пропускали сыворотку со скоростью 60 мл/ч х смг, Элюцию.: сорбированйьх антител йроводили ЦФБ (рН 2,5) со скоростью 12 мл/ч х см . Объем фракций элюироваййцх антител составлял 2.мл. Пробы нейтрализовали 0,5 н раствороМ. гидроокиси натрия. Титр специфичных анти-А антител во фракциях составлял 1 ;1024. Гетероантитела в полученных фракциях отсутствовали. Ф о р му л а. и з о б р е т е н и яСпособ получения реагента для типирования антигенов эритроцитов путем аффинной хроматографии,:. сырья АВО специфичйости на агарозе, активированной бромцианом и конъюгированной с антигенами А и В специфичности, сорбции антител из сыворотки с последующей их элюцией с сорбента буферным раствором, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью павышения выхода целевого продукта и упрощения способа, в качестве антигенов А и В специфичности используют фруглумин А и В, выделенный из слизистой оболочки желудка . животных, сорбцию антител проводят со скоростью 50 мл/ч х см, а элюцию осуще-: ствляют цитратно-фосфатным буферным раствором при рН 2,О - 2,5 со скоростью 10 мл/ч х смг,