Способ получения кальцитонина

О П И С-А"Н.".ИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик 1 ц 72719 61) Дополнительное к авт. ид-ву -2) Заявлено 13.09.78 (21) 2663070/28-13присоединением заявки-3) Приоритет -5/26 Гасударственные комнте СССР(53) УДК 615.45. .615.34 (088.8) сания 25.04.8 ата опчбликовани Д. Гафурова, А. Л. Стальмаков М. Кочергин и А. А. Гендроли Г, К. Коротаев, Е. В. Гамазина 72) Авторы изобретения Всесоюзный научно-исследовательский институт технологи кровезаменителей и гормональных препаратов1) Заявите ОСОБ ПОЛУЧЕ 1 АЛЪЦИТОНИНА осущестто привох комплекпродукта, ие выхода ехнологии то кисленратуре абаты- фадек- кислензате-сп ра Пример 1. 40 кг стовидной железы свиляют 180 литров 86 Оного соляной кислотоную смесь перемештемпературе (20 С)окончании экстракципрозрачному экстракт женной щиают, добав- подкислен 05,полученкомнатнои ,5 часов, по тделяют, к т 4 объема вежеза мор о ней измельч /о ацетона, йдорНО, ивают при в течение 1 и, жмых о у добавляю Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способам получения кальцитонина из щетовидной железы.Известен способ получения кальцитонина путем экстракции щитовидной железы 0,2 н раствором уксусной кислоты при температуре 70 С, очистки экстракта путем ионообменной хроматографии на анионите ИРАс последующим растворением сырца в смеси 40 О 1 О уксусной кислоты и бутанола с добавлением гептана и лиофилизацией. Получен ный продукт очищают на сефадексе, лиофилизируют и вновь очищают с помощью противоточного распределения в двухфазной системе растворителей бутанол-вода-уксусная кислота (5:4:1), затем добавляют гептан и после ргсслаивания, водные фракции объединяют и лиофилизируют. Выход гомогенного кальцитонина 54 - 270 ЕД на 1 кг сырья с активностью 200 - 270 ЕД(мг 1.Однако известный способ является сложным и трудоемким процессом, включающим: 2 противоточных распределителя, 2 ионообменных и 1 гелевая хроматографии, 4 - 6 лиофилизаций - делают его неудобным для промышленного получения кальцитонина. Кроме того, экстракция сырья вляется при температуре 70 С, ч дит к денатурации многих белковы сов и снижает выход целевого Цель изобретения - повышен целевого продукта и упрощение т производства. Поставленная цель достигается те сырье экстрагируют ацетоном под ным соляной кислотой при темпе 4 - 25 С, полученное извлечение обр вают ацетоном и перед очисткой на се се остаток обрабатывают водой под ной уксусной кислотой, эталоном,осаждают целевой продукт из водно тового раствора избытком ацетона. Способ поясняется следующими727197 Формула изобретения Составитель Т. Павлович Техред К. Шуфрич Корректор М. Вигула Тираж 673 Подписное ЦН И И П И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 4Редактор Н. Катаианина Заказ 1015/2 3ацетона, смесь выдерживают при 2 - 8 С втечение 15 - 17 час.Надосадочную жидкость декантируют, аосадок высушивают ацетоном.280 г полученного сырца кальцитонинарастворяют в 28 л смеси содержащей бутанол, воду, уксусную кислоту в соотношении5:4:1. Через 4 час нижнюю фазу отделяют иотбрасывают, а к верхней фазе добавляют10 объемов ацетона и оставляют при комнатной температуре на 4 - 6 час.Надосадочную жидкость декантируют, а 10осадок высушивают ацетоном,28 г полученного продукта (с активностью 6 - 8 ЕД/км) растворяют в 560 мл воды,подкисленной уксусной кислотой до рН4,5 и добавляют этанол в концентрации 85%.иЗатем с помощью 12% раствора аммиакаповышают рН до 6,5, выпавшие в осадокбалластные вещества отделяют, а к раствору добавляют 10 объемов ацетона, смесьоставляют при комнатной температуре на4 часа, надосадочную жидкость декантируют, осадок высушивают ацетоном.6 г полученного продукта (с активностью25 - 30 ЕД/мг) растворяют в 60 мл 1 М уксусной кислоты, вносят в колонку размером4,3 134 см наполненную сефадексом Г(тонкий) и элюируют этим же растворомсо скоростью 150 мл/час. Объем фракции15 мл. Фракции третьего пика, соответствующие пробиркам 110 в 1, объединяют илиофилизируют.Вес продукта 400 мг с активностью нениже 200 ЕД/мг.Пример 2. 250 г лиофилизированной щитовидной железы крупного рогатого скотаизмельчают, добавляют 1750 мл 76/, ацетона, подкисленного соляной кислотой до рН 1,перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре, по окончании экстракции жмых отделяют, а к прозрачному экстракту добавляют 4 объема ацетона, смесь выдерживают при 2 - -8 С в течение 15 17 час, затем надосадочную жидкость деканти руют, осадок высушивают ацетоном.Вес сырца кальцитонина 3 - 4 г, активность 0,6 - 0,8 ЕД/мг.Далее сырец кальцитонина очищают, как описано в примереПредложенный способ получения высоко- очищенного кальцитонина позволяет более чем в 10 раз повысить выход чистого кальцитонина до 2400 ЕД на 1 кг щитовидной железы с стандартной активностью не ниже 200 ЕД/мг. Способ получения кальцитонина, путем экстракции щитовидной железы растворителем, обработки извлечения смесью бутанола, воды, уксусной кислоты, очистки на сефадексе и лиофилизации, отличающийся тем, что. с целью повышения выхода целевого продукта и упрощения технологии производства, сырье экстрагируют ацетоном подкисленным соляной кислотой при температуре 4 25 С, полученное извлечение обрабатывают ацетоном и перед очисткой на сефадексе остаток обрабатывают водой подкисленной уксусной кислотой, этанолом, затем осаждают целевой продукт из водно- спиртового раствора избытком ацетона,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. 1. В 1 ос 11 ешЫгу 1970, 9, 1665.