Способ дифференциации холерных вибрио-hob ot негазообразующих аэромонад

Союз Советских Социалистических Реслублик(22) Заявлено 040978 (21)2 б 58740/28-13с присоединением заявки Мо(51)М. Кв,З С 12 К 1/04 3 оеударствеини Й комитет СССР по делам изобретений и открытий(71) Заявитель Ростовский-на-ДОну государственный научноисследовательский противочумный институт(54) СПОСОБ ДИФФЕР ОТ НЕГАЗОО Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно, дифференциации холерных вибрионов от близкородственных микроорганизмов.Известен способ дифференциации холерных вибрионов от негазообразующих аэромонад путем выращивания микробов на плотной питательной среде с последующей обработкой полученной суспензии микроорганизмс.д химическими реагентами 1).Однако известный способ не всегда позволяет отдифференцировать холерные вибрионы от негазообразных аэромонад и сроки микробиологического анализа длительны (до 4-5 суток),Целью изобретения является повышение чувствительности и ускорение способа.Эта цель достигается тем, что микробы выращивают на плотной питательной среде с последующей обработкой полученной суспензии микроорганизмов химическими реагентами, суспензию микроорганизмов обрабатывают 1-ным раствором Формалина, доводят концентрацию микробных клеток до 400 млрд клеток/мл, добавляют 0,15 М фосфатный буфер, содержащий 0,3 ЕНЦИАЦИИ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ БРАЗУОЩИХ АЭРОМОНАДВ (-2г0,5 мг гл:окозооксидазы, затем выделяют О-антиген и при наличиии в немфруктозы дифференцируют холерныевибрионы,П р и м е р . Берут штамм холерного вибриона 2913 и штамм не образующий газ аэромонады Р 6021 засевают на обычные твердые питательныесреды. Через 18 ч выращенные при37 оС культуры смывают физиологическим раствором и обезвреживают путемдобавления в суспензию клеток формалина до 1%-ной концентрации и клеткитрижды отмывают Физиологическим раствором. В суспензиях определяют концентрацию клеток. В опыт берут по400 млрд клеток, которые еще раэ отмывают Физиологическим раствором пркцентрифугировании. Осадки клеток сус пендируют в 3 мл 0,15 М фосФатномбуфере рН,4, содержащем Ферментглюкозооксидазу (0,3-0,5 мг на пэобу). Смесь инкубируют 5 ч при 37 С.После инкубирования из клетокэкстрагируют специфический О-анткген , путем добавления 3 мя 70-ного вод. ного раствора фенола, Экстракцию ведут в течение 1 ч при комнатной температуре, встряхивая через 10-15 мин. З 0 После экстракции пробы центрифугкЗаказ ОО 6/92 Тираж 528 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППН "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 руют при 5000 об/мин в течение 20 мин.Образующийся верхний слой декантируют и используют в реакции. К каждой пробе добавляют по 2 мл 0,1-ногораствора уезорцина в 95-ном этанолеи б мп концентрированной соляной кислоты. Пробы выдерживают на водянойбане при 80 С до положительной реакции в контрольных пробах с фруктозойи с типичным контрольным штаммом холерного вибриона. Положительные пробы, содержащие фруктозу и относящиеся к виду холерных вибрионов, окрашиваются в красный цвет в отличие отнегаэообразукицих аэромонад, которыене окрашиваются по сравнению с контролями. Опыт сопровождают следующими контролями: одна проба с Фруктовой 25 мкг , одна проба с заведомотипичным штаммом холерного вибрионаи проба, не содержащая клеток микроорганизмов и фруктозы. 20 Предлагаемый способ повышает чувствительность и достоверность дифференциации холерных вибрионов от негазообразующих аэромонад, сокращает время дифференциального анализа на 3-3,5 суток, однотоновое изменение окраски улучшает регистрацию результатов. Способ дифференциации холерныхвибрионов от негаэообразующих аэромонад путем выращивания микробов наплотной питательной среде с последующей обработкой Полученной суспензиимикроорганизмов химическими реагентами, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения чувствительности и ускорения способа, суспензиюмикроорганизмов обрабатывают 1-нымраствором формалина, доводят концентрацию микробных клеток до 400 мпрдклеток/мл, добавляют 0,15 М фосфатный буфер, содержащий 0,3-0,5 мг глюкозооксидазы, затем выделяют О"антиген и при наличии в нем фруктозы дифФеренцируют холерные вибрионЫ.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Либинзон А,Е. и др. О возможных ошибках при бактериологическойдиагностике холеры, - Лабораторноедело", 1977, В б, с. 356-358.