Способ дифференциации лизогенных штаммов холерных вибрионов

(19) И 63) О Е ИЭОБРЕТЕНИ К ОРСКОМ ДЕТЕЛЬСТВУ ЗОГЕННЫХ к медижет быть Изобретен робиологи вано при диагностике Цель изобретения ности способа. Способ осуществля образом.холеры. повышение ч-,ся следующи енные бактеитательной вей и выращивают еде, содержа ии 10-207., в ем наносят в о штамма ЧЪ Лиидкойочевиечени в концентра 2-48 ч и за индикаторно весь хо азо е 1 со едут через .12-14 ч иа индикаторного штаммии лизиса индикаторнеренцируют 1 тип лизпродуцирующих фаг, у налиа фагом. й кульУчетию лизии налиры диффаммов генны оичи, ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ ГКНТ СССР(54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИШТАММОВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНО(57) Изобретение относитсцинской микробиологии и м относится к медицинской и может быть использо(51)5 С 12 И 1/20, С 12. Я //(С 12 Я 1/001 С 12 К использовано при диагностике холеры.Цель изобретения - повышение точности способа. Лизогенные культуры холерных вибрионов выращивают в жидкойпитательной среде, содержащей мочевину в концентрации 10-203, в течение 12-48 ч, затем наносят взвесьна газон индикаторного штамма Ч.е 1 от, засеянного в один из слоевплотной питательной среды. Учет ведут через 12-14 ч по наличию лизиса индикаторной культуры фагом. Приналичии лизиса индикаторной культурыопределяют лизогенный штамм холерноговибриона, продуцирующего устойчивыйк мочевине фаг, а при отсутствии лизиса - лизогенный штамм, продуцирующий чувствительный к мочевине фаг,вый к мочевине). Отсутствие лизисасвидетельствует о принадлежности штаммов ко 11 типу (продуцирующих фаг, (рчувствительный к мочевине).Способ иллюстрируется следующимипримерами.П р и м е р 1. Для приготовления 1раствора мочевины берут навеску 10 г,вносят в 1.00 мл бульона Мартена (рН7,6-7,8), Среду стерилизуют кипячением в течение 30 мин и разливают по2 мл в пробирки. Бульон с мочевинойсовершенно прозрачен.вайаОтсеивают в две пробирки с 2 млбульона, содержащего 107 мочевины,по одной петле суточных агаровыхкультур лизогенных вибрионов эльтор377 и 1540. Выращивают в течение1578189 Штаммы вибрионов эльтор 377 образуют зону фаголизиса (1 тип).Использование способа позволяет повысить точность дифференциации за счет выявления различий внутри лизогенных штаммов по свойствам продуцируемых фагов - чувствительных (11 тип) и устойчивых (1 тип) к мочевине. Формула изобретения Составитель А.ЗавадскаяРедактор М.Недолуженко Техред М.Ходанич Корректор С, Черни Заказ 1891 Тираж 497 Подписное ВНИИПО Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 12 при 37 С. Готовят плотную питательную среду, содержащую индикаторную культуру вибрионов эльтор 75,для чего 0,2-0,3 мл 4-5-часовойбульонной культуры вносят в 4 мл0,77.-ного растопленного агара Мартенаи высевают на поверхность агаровойпластинки в чашки Петри двухслойнымметодом. На подсушенный газон наносятна расстоянии 5 см друг от друга поодной капле выросших бульонных куль:тур и ставят посевы в термостат при37 С на 1 сут. Учитывают результаты.Ятаммы вибрионов эльтор 377 образуютзонУ фаголизиса (1 тип), штамм 1540 не дает лизиса индикаторной культуры (11 тип),П р и м е р 2, Отсевают в пробир", 2 р ку с 22 мл бульона, содержащего 153- мочевины, одну петлю суточной агаровой культуры классического холерного вибриона 5281. Посев и учет проводят так же, как в примере 1. Вре" 25 мя контакта с мочевиной 24 ч. Штамм вызывает лизис индикаторной культуры (1 тип),П р и м е р 3. Отсевают в пробир" ку с 2 мл бульона, содержащего 203 ЗО мочевины, штамм Ч,е 1 ог 377 Время контакта с мочевиной 48 ч, Посев и учет проводят, как в примере 1.Способ дифференциации лизогенных штаммов холерных вибрионов путем выращивания исследуемой культуры в жидкой питательной среде с последующим пересевом выросшей культуры на плотную двуслойную питательную среду, один слой которой засеян индикаторной культурой, инкубированием посевов и учетом результатов по характеру лизиса индикаторной культуры, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, выращивание в жидкой питательной среде проводят в течение 12-48 ч в присутствии 10-202 мочевины и при наличии лизиса индикаторной культуры исследуемую культуру относят к лизогенной, продуцирующей устойчивый к мочевине фаг, а при отсутствии лизиса культуру относят к лизогенной, продуцирующей чувствительный к мочевине фаг,