Способ дифференциации -форм от бактериальных форм холерного вибриона

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 19) ( 3 4(51) С 12 1/О ССУД АРСТВЕНН О ДЕЛАМ ИЭОБ ОМИТЕТ СССР ТЕНИЙ И ОТНРЫТИ(56) 1. Авторское свпо заявке Ф 343522кл, С 1 г О 1/04, 1982(54)(57) 1. СПОСОБИ-ФОРМ ОТ БАКТЕРИАЛЪГО ВИБРИОНА путем вьры на питательной ср ДИФФЕРЕНЦИАЦИИНЫХ ФОРМ ХОЛЕРНО- )ращивания культуеде, о т л и -я тем, что, с целью оба, на поверхность вынаносят каплю смеси, ,005-0,053-ного раствоубого тетразолия хло- мМ концентрации одного цикла Кребса, взятых в 1, и дифференциацию териальиых форм холеросуществляют по отсутния колоний.о п.1, о т л и ч а ючто в качестве субребса используют яб, янтарную кислоту,изоцитрат натрия или ч ающий сускорения спосросших колонийсостоящей из 0ра И -нитроголрида и 10-25из субстратовсоотношенииК -форм от бакного вибрионаствию окрашива2. Способ пщ и й с я темстрата цикла Клочную кислотуцитрат натрия,Ф-кетоглутаратЗаказ 3938/31 Тираж 525 ПодписпоеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035) Москва, 3-35, Раушская наб., д.4/5 Филиал ППП"Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 1 11615Изобретение относится к микробиологии и касается выявления к-форм холерного вибриона.Известен способ дифференциации М-форм от бактериальных форм холерно го вибриона путем выращивания культуры на питательной среде с последующим приготовлением бактериальной суспензии и определение в ней одного из конечных продуктов перекисного окисле ния липидов малонового диальдегнда с помощью тиобарбитуровой киопотм И .Однако известный способ длителен.Цель изобретения - ускорение способа. 15Поставленная цель достигается тем, что согласно способу дифференциации К-форм от бактериальных форм холерного вибрииона путем выращивания культуры на питательной среде на по р верхность выросших колоний наносят каплю смеси, состоящей из 0,005- Ор 05 Х-ного раствора й "нитроголубого тетразолия хлорида и 10-25 мИ концентрации одного иэ субстратов цикла 25 Кребса, взятых в соотношении 1: 1, и дифференциацию К"форм от бактериальных форм холерного вибриона осуществляют по отсутствию окрашивания колоний.39В качестве субстрата цикла Кребса используют яблочную кислоту, янтарную кислоту, цитрат натрия, изоцитрат натрия илн К-кетоглутарат.П р и м е р 1. Непосредственно на подозрительную колонию, выросшую на плотной питательной среде, наносится капля смеси, состоящей из 0,05 Х"ного раствора И -нитроголубого тетразолия хлорида и 25 мМ раствора ф иэоцитрата в соотношении 1: 1, Отсут-ствие окраски свидетельствует о наличии М -форм холерных вибрионов. При раскапывании предлагаемой смеси на колонии бактериальной формы холеры 5 мгновенно появляется интенсивно-синяя окраска, свидетельствующая о вос-55 2становлении тетразолия в присутствии субстрата цикла Кребса.Определение можно проводить и на стекле.П р и м е р 2. На предметное стекло помещают каплю смеси, состоящей из Ор 005 Е-ного раствора и -нитроголубого тетразолия хлорида и 10 мИ раствора субстрата цикла Кребса - малата в соотношении 1:1 и суспендируют в ней петлей часть колонии, подозрительной на М-форму холерного вибриона. При наличии в культуре К- бтрансформированных клеток холерного вибриона восстановления тетраэолия не происходит, окраска не развивается, В качестве контроля использовали заведомо бактериальную форму холерного вибриона. При суспендировании в указанной смеси колоний бактериальных культур холерных вибрионов в течение 2-5 мин происходит восстановление тетразолия до формазана и появления синего окрашивания капли. П р и м е р 3. На предметное стекло помещают каплю смеси, состоящей из Ор 057.-ного раствора м -нитроголубого тетразолня хлорида и 15 мИ раствора К-кетоглутарата в соотношении 1: 1. Затем капилляром пастеров- ской пипетки берут часть колонии и опускают пастеровскую пипетку с подозрительным на М-формы материалом в каплю смеси. Контроль. Пастеровская пипетка с вегетативной формой холерного вибриона. Материал, подозрительный на М-формы холерного вибриона, скрашивания не дает. В контрольной пастеров- ской пипетке в .течение 5 мин культура окрашивается в синий цвет.Использование изобретения позволяет упростить и ускорить (2-5 мин вместо 18-24 ч) проведение дифференциации Ы -форм от бактериальных форм холерных вибрионов.