Способ исследования структурных перестроек хромосом эукариот

- -изобретени 71) Заявите СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРНЫХ ПЕРЕСТРОЕК ХРОМОСОМ ЭУКАРИОГчас тиостом, что Изобретение относится к области молекулярной генетики и питогенетики эум- риот, а также селекции сельскохозяйст венных растений н животных,Известен способ исследования струк турных перестроек хромосом аукариот,випочаюший в себя мутагенное повреждение хромосом химическим агентом и ре- гистрапию количественных и качественных показателей структурных перестроек хромосом13Способ не позволяет прово дить исследования механизмов структурФ ных перестроек хромосом эукариот при заранее заданных и контролируемых экспериментальных условиях, в частности щщ контролируемом повреждении хромосом т 5 еукарйот в изолокусе хромосомы.Известен также способ исследования структурных перестроек хромосом эукарит, при котором индупируют только од- ,нонйтевые разрывы молекулы ДНК путемобработки БУДРом. Этот способ осуществляет следующим образом. Клетки обрабатывают БУДРом в . В= стадии первого митотического цикла, облучают длинноввтновыми Уф-лучами на стадии б, второго митотического цикла. Далее регнсгрируют количественные н качестченные показатели структурнйх перестроек хромосом эукариот 2)Такой способ не позволяет исследовать молекулярные механизмы перестроек хромосом эукариот взаранее запрограммированных и эксйериментально контролируемых условиях, в частности, при контролируемом повреждении молекул ДНК в изолокусе хромосом эукаоиот,Целью изобретения является изучение молекулярных механизмов образования перестроек хромосомэукарнот на базе экспериментально контролируемого локального повреждения молекул ДИК хромосом эукариот в изолокусе.Поставленная пель достигается тем, что проводят дополнительные воздействия на молекулы ДНК хромосом аукариот, вти эти воздействия заключаются вна молекулы ЙНК хромосом эука673247 Составитель Л. МарченковаРедактор М, Харитоном Техред О, Андрейко Корректор Г. НазароваЗаказ 3948/3 Тираж 7.54 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москм, Ж, Раушская набд, 4/5филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 3риот наносят повреждения типа цикло-бу тановьц димеров, выделяют и обрабатыватот клетки иа стадиипервот о митотического цикла агентом, включающимся в молекулы ДНК хромос 6 м эукариот который приводит5 к однонитевым разрывам молекул ДНК хромосом эукариот во втором митотическом цикле при облучении длинноволновыми УФ-лучами.Способ осушествляется следующим об разом.Однослойную культуру Меток китайско го хомячка (клон % 237) облучают коротковолновыми УФ-лучами с длиной волны меньше 300 нм на стадии С первого митотического цикла, после стадиипервого митотического цикла, в которой происходит репликация молекул ДНК, на стадии С первого митотического цикла клетки обрабатывают БУДРом в концентрации 10 /мл среды и колхицином в койцент рации 0,78 т /мл среды, во втором мито тическом цикле на стадии О: облучМт длинноволновыми Уф-лучами с длиной волны больше 300 нм в дозе 4 10 эрг/ми 2 д2-2 10 ф эрг/ммКлетки фиксируют в смеси метанола с уксуСной кислотойв пропорции 3:1, окрашивают карбол-фук- сином и регистрируют количественныеи качественные показатели структурный пере;50 стро.к хромосом.При использовании предлагаемого способа получатот первичные йовреждения молекул ДНК хромосом эукариот, причрм повреждения определенного типа, а также получают возможность трансформации пер- вичных повреждений молекул ЙНЙ"в ходе генетичесяих процессов, происходяших в жйвой клетке, Это 1 тозволяет при дополнительном воздействии создавать экспериментально контролируемые условия, а именно локальную модификацию структуры молекулы ДНК хромосом эукариот,формула изобретения1, Способ исследомния структурных45 перестроек хромосом эукариот, випочаю 4ший в себя повышение чувствительностимолекул ДНКхромосом к последующимвоздействиям;нанесение первичных повреждений молекулам ДНК хромосом с повышенной чувствительностью на опредеценном этапе мутагенеза и регистрациюструктурных перестроек хромосом в мт- тозе, о т л и ч а ю ш и й с я тем, что,с целью изучения механизмов перестроекхромосом эукариот в экспериментально.контролируемых условияи при получениипервичных повреждений молекул ДНК хромосом, в заранее подготовленном локусеучастке хромосомы предварительно выделяют зону изменений ЛНК хромосом, повышают чувствительность молекул ДИКхромосом в выделенной локальной зонеи наносят первичнйе повреждения молекулам ДНК хромосом в области повышеннойчувствительности в выделенной зоне.2, Способ по и. 1, о т л и ч а юш и й с я тем, что, с целью изучениямеханизмов образования перестроек хромосом эукариот при локализации первичных повреждений, однонитевых разрывов,мойекул ЛЙК в изолокусе сестринскиххроматид в нитях одной полярности, предварительно выделяют зону изменения молекул ДНК типа цикло-бутановых димеровоблученйем клеток Уфнм на стадииО первого митотического цикла, повышают чувствительность молекул ДНК хромосом в выделенной локальной зоне вве-денйем БУДРа только на стадии,Я 2 первого митотического цикла и только на стадии О 2 второго митогического цикпа инаносят первичные повреждения молекулам ДНК с повышенной чувствительностьюв выделенной зоне облучением Уф 313 нмтолько на стадии О второго митотического цикла,Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе1: Дубинин Н. П. Общая генетика, М.,Наука" 1976, с. 279-344,2,ИиаИоп гевеагсЪ 20,.И 3,р.р. 403-416.