Способ очистки липазы от пигментов

(54)(57) СПОСО АВРаАИАМОВ 1 0 обработки ее в бентом с пос целевого ироду ванием, о т л что, с целью п целевого ироду бента использу ноосновный ани тилированных с дивинилсульфид триметиламином твом ахм идовапромышарболиттелье тво СССР 70 (п кл. С тотип ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71) Кемеровский научно-исслтельский институт химическойленности Кемеровского НПОи Всесоюзный научно-исследовский биотехнический институт) Б ОЧИСТКИ ЛИПАЗЫТ ПИГМЕНТОВ посред одных растворов адледующим осаждением кта ацетоном и выс и ч а ю щ и й с я овыщения активност кта, в качестве ад ют макросетчатый с онит на основе хло ополнмеров стирола а, модифицироваины655150 4,48 ВНИИПИ Эаказ 3948/1 Тираж 522, Подписное Филиал ППП фПатентф, г. Ужгород, ул.Проектная, 4 1Изобретение относится к способамполучения высокоочищенных фермент-ных препаратов, в частности к способу очистки липазы (КФ 3.1.1,3),фермента, который находит применениев микробиологической промышленности, 5в.пищевой промышленности и в медицине.В литературе описаны способы очистки липазы. Известен например, способ очистки липаэы животного происхождения посредством многократногофракционирования сульфатом аммония,диалиэа с последующим осаждениемфермента ацетоном и высушиванием (1.,Недостатком этого способа являетсянизкая.активность получаемого препара,та фермента.Известен также способ очисткилипазы Аяр. акащог 1 посредством многократного фракционирования сульфатом аммония с последующим осаждением ИФермента и высушиванием 21. Недостатком этого способа также является низкая активность получаемых ферментныхпрепаратов (5000-1200 ед), обусловленная высоким содержанием в них пиг ментов и других балластных веществ.Пель изобретения - повышение активности целевого продукта.Это достигается за счет того,чтоводные растворы, содержащие фермент Олипазу, обрабатывают адсорбентом,представляющим собой макросетчатыйсильноосновный анионит на основехлорметилированных сополимеров стирола и дивинилсульфида, модифицирвванных триметиламином.Предлагаемый способ очистки липазыАяр. ажащягь с повышенной активностью целевого продукта, заключаетсяв обработке водных растворов фермента адсорбентом, представляющим собой 4 Омакросетчатый сильноосновный анионитна основе хлорметилированных сополимеров стирола и дивинйлсульфида, моддифицированных триметиламином, с последующим ) осаждением целевого продук 45кта ацетойом и высушиванием.Предпочтительно процесс проводятследующим образом.Культуральную жидкость Аяр. ажащо.г 1 обрабатывают макросетчатым сильноосновным анионитом на основе сополимеров стирола и дивинилсульфидамодифицированных триметиламином,(АВС) в хлоридной форме (сополимер с содержанием серы 05-2,0) прирН 8-9, температуре 8-10 С и соотношением массы сухого анионита иобъема раствора фермента 1:40. Времяконтакта анионита и раствора Фермента 1,5-2,5 ч. При этом достигается8-9-кратная степень осветления раствора фермента, Нелевой продукт выделяют осаждением ацетоном с последующим Фильтрованием и высушиваниемпри 20-25 С,П р и м е р 1. В плоскодоннуюколбу емкостью 100 мл помещают0,6250 г, в пересчете на сухой вес,анионита АВС в хлоридной форме,заливают 25 мл 2,5 а-ного культурального раствора грибковой липаэы Аяр.аюащог 1 ( рН 8,0) и выдерживают 2 чпри 10 С и периодическом перемешивайнии. Осветленный раствор липаэыфильтрованием отделяют от грануланионита, Степень осветления растворасоставляет 9,6 раза. Иэ растворафермент выделяют осаждением 75 млацетона с последующим фильтрованиемя высушиванием при 20-25 С.Активность очищенной липаэы550000 ед.Выход 97 а.Физико-химические свойства анионита АВ:-17 С.Удельный объем в хлоеридной форме в воде,мл/г 48,5Обменная емкость в статич".сческих условиях по 0,1 н.раствору НС 1, мг-экв/г 4,25Содержание серы в исходномсополимере,Ъ 1,5П р и м е р 2. В плоскодоннуюколбу емкостью 100 мл помещают0,6250 г в пересчете на суМой вес .анионита АВС в хлоридной форме,заливают 25 мл 2,53-ного культурального раствора грибковой липаэыАяр.аыащог 1 (рН 8,0) и выдерживают2 ч при 8 С и периодическом перемешивании. Осветленный раствор липаэыфильтрованием отделяют от гранул анионита. Степень осветления растворасоставляет 9,3 раза, Из растворафермент выделяют осаждением 80 млацетона с последующим фильтрованиеми высушиванием при 20-25 С,Активиость очищенной липазы500000 ед.Выход 98Физико-химические свойства анионита АВС.Удельный объем в хлоридной Форме в воде,мл/г 37,1Обменная емкость в статиеских условиях по 0,1 нраствору НС 1, мг-экв/гСодержание серы в исходном сополимере,Ъ 1,7