Способ получения нуклеопротеида вируса гриппа

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз Советских Социалистических Республик650625 ТОе СКОМУ СВИДВТВЛЬ СТВО) Дополни льное к авт. св Заявлено 11,05,77 21) 2484384/2851) М. К с присоединением заявкиА 61 К 37 А 61 К 35 ааударственнвй квинтет СССР нн делам нзобретеннй н аткрытнй. Иванова, А, А. МаныкинКлименко Авторыэобретен стнтут вирусологии 71) Заявитель 1,54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Н ВИРУСА ГРИПП1Изобретение относится кобласт течение 18 часов при температуре 37 Спри соотношении 2 части белка бромлайна на 1 часть белка вируса.Субвирусные структуры-вирусы, лишенные наружных оболочечных белков, 5 осаждают центрифугированием при30 000 об/мин в течение 1 часа и суспендируют в буфере Трис-НС 1 рН 7,4.Затем их подвергают дополнительнойочистке центрифугированием в плотносэ О ном градиенте хлористого цезия, сернокислого цезия или твртрата калия приплотности 1,30-1,05 г/смЕ при22 000 об/мин в течение 18 часов,Фракции, содержащие субвирусные части цы,фотбирают, разводят буфером, осаждают при 30 000 об/мин в течение1 часа. Степень удаления наружной обопочки контролируется электронномикроскопически.2 ц Очищенные субвирусрушают детергентами:натрия, тритоном и эфитеид их разрушенных цины, а о к вирусологии.соб получения нуклеогриппа путем обработс последующим выделеродукта экстракциейнтным центрифугированиИзвестен с ротеида вирус и детергентом ием целевогоэфиром и градем Я.,Однако преп рат, получезагрязняется ный извест- олипептиданым способом,ми оболочки.Белью изобие чистоты п тения является повь па цель достигается тем, что вирустельно обрабатывают бромлайделяют субвирусные частицыциальным центрифугированием ивают цх детергентом.б осуществляют следующим общенные преиз алланные частицы раздезоксихолатом ром. Нуклеопросубвирусных часх кур омлайн предвари ном, вы дифферен обрабать Спосо разом. Концентрированные и оч параты вирусов, полученные тоисной жидкости зараженнь эмбрионов, обрабатывают б650625 Составитель С. МалютинаРедактор О, Иванова Техред Ю. Ниймет Корректор О, Билак Заказ 677/6 Тираж 671 Подписное ИНИИПИ Государственного комитета СССР по депам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП Патент, г, Ужгород, уп, Проектная, 4 тиц попучают центрифугкрованием в пинейном градиенте концентрации глицерина 15-30% при 16 000 об/мин в течение 18 часов. фракции нукпеопротеида диапизуют в течение 18 часов при 4 С против буфера Трис-НС 1 0,02 М рН 7,4, содержащего 0,02 М М аС 1 0,002 М ЭДТА.Чистота препарата нукпеопротеида контропируется эпектронномикроскопичеоки и иммунопогически. Препарат содержит только спирали нукпеопротеида диаметромоколо 15 нм.Препарат нукпеопротеида, полученный предлагаемым способом, антигенно монопитен, стимулирует при введении крысам преципитирующие антитела только к нукпеопротеиду, но не к обопочечным бенкам. В реакции преципитации выявпяется одна поноса, отражающая взаимодействие антисыворотки с нукпеопротеидным антигеном испытуемого вируса гриппа рода А. Реакция преципитации не набнюдается с хозяйским компонентом хориоаплантоисной оболочки куриного эмбриона нуклеотидным антигеном штамма В l Ьее/40 и парагриппозного вируса Сендай;Предпагаемый способ позвопяет попностыо устранить загрязнение препарата побочными бенками, что в свою очередь, предотвращает ошибки при изучеиии аминокиспотного состава, пептидных карт и морфопогическцх характеристик при исследовании эпидемически активных штаммов вируса гриппа на молекулярно биологическом уровне.Высокая степень чистоты и антигенная гомогенность препарата нукпеопротеида позвопяют использовать его для получения высокоактивных моноспецифи ческих антисывороток гриппа А и И, необходимых для тонкого антигейного анализа штаммовых отпичий в нуклеопротеиде, и также выявления роли вирусов гриппа животных в происхождении панде мическк щтаммов. фор мула изо бретения Способ попучения нуклеопротеида ви руса гриппа путем обработки детергентом с поспедующим выдепением целевого продукта экстракцией эфиром и градиентным центрифугированием, о т и ич а ю щ и й с я тем, что, с цепью повышения чистоты препарата, вирус предваритепьно обрабатывают бромпайном,выделяют субвирусные частицы дифференциальным центрифугированием и обрабатывают их детергентом.Источники информации, принятые вовнимание прк экспертизе1 Л ЛгЬГОф 1972 10, 795 800.