Способ повышения биологической активности вирусов гриппа

/ ТЕН Б и др, В 1 просы6",. ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНВЕДОМСТВО СССР(56) Сомина А,А, и др, В кн.: Молекулярнаябиология и генетик вирусов гриппа, Л.,1983, с. 153,Вотяков В,И, вирусологии, 1984, т, 4, с. 4 Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской вирусологии, и может быть использовано в научных исследованиях для повышения биологической активности вирусов гриппа и изучения коррелирующих с ней признаков, а также в научно-практической работе для получения высокорепродуктивных вэкцинных штаммов.Целью изобретения является повышение биологической активности (инфекционной и иммуногенной) вирусов гриппа типов АиВ,Это достигается путем и редвэрительного гассирования в присутствии сублетальной дозы химиопрепарэта специфического действия (ремантадина - для типа А и адапромина для типа В) вирусов гриппа,Способ осуществляется следующим образом.В куриные эмбрионы 10-дневного возраста вводят ремантадин или адапромин из расчета 200 мкг/мл (2 мг нэ эмбрион) ремантадина для вирусов гриппа А или 500 мкг/мл (5 мг на эмбрион) адапромина для вирусов(54) СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ БИОЛОГИЧЕ,СКОЙ АКТИВНОСТИ ВИРУСОВ ГРИППА (57) Использование: вирусология, биотехнология, Сущность изобретения: биологическую активность вирусов гриппа повышают путем пассирования в присутствии противо- вирусных препаратов. Для вируса гриппа А используют ремантэдин в дозе 2 мг на эмбрион, а для вируса гриппа В - адэпромин в дозе 5 мг на эмбрион, 1 табл. гриппа типа В, Эмбрионы после этого выдерживают в термостате в течение 1,5 - 2 часов, затем вводят вирусы гриппа и инкубируют в термостате в течение 48 - 72 часов в зависимости от типа вируса гриппа. Проводят 2 пассажа с интервалом 3 дня, Инфекционный титр определяют методом предельных разведений и выражают в 9 ЭИД 50,П р и м е р 1. Для повышения биологической активности вируса гриппа в куриный эмбрион вводится ремантадин для вируса гриппа типа А или адапромин для вируса гриппа типа В, через 1,5-2 часа проводят зара)кение эмбрионов вирусами - по 0,2 мл десятикратных разведений вирусосодержащей жидкости, Инкубацию проводят в течение 48 часов при температуре 35,5 для вирусов гриппа типа А и 72 часа при температуре 33 для вирусов гриппа типа В. Полученную вируссодержащую жидкость титруют на куриных эмбрионах методом предельных разведений и определяют инфекционный титр в 9 ЭИД 5 о, Параллельно проводится титрование вирусов, пассиро1806189 Таким образом, пассирование вирусов гриппа в присутствии химиопрепаратов можно применять для получения высокоиммунных сывороток лабораторных животных, используемых при проведении научных исследований, а также при подготовке вакцинных штаммов для повышения их инфекционной и иммуногенной активности,Влияние культивирования вирусов в присутствии химиопрепаратов на их инфекционно;ь Ин ек ионные тит ы в ЭИ щ Вирусы гриппа Пассирование с химиопрепарэтом (2 пассажаПассирование безхимиоп репарата А/Прага/1/84(Н 1 М 1)А/Хабаровск/74/77(НЗ%2)В/Ленинград/17/865/1-В/Ленинград/17/86 6,23+0,45 5,23+0,48 4,00+0,45 6,00 М,36 5,77 й 0,36 8,00 +0,49 р 0,02 р 0,001 р 0,001 р 0,02 р 0,02 7,77+0,49 8,00+0,45 7,33+0,48 7,33 + 0,48 5,50+0,41 4,77+0,45 5,33+0,45 р 0,001 р 0,001 р 0,001 7,50+0,32 7,00+0,48 7,00+0,36 Составитель Т, РыбаковаТехред М.Моргентал Корректор А, Обручар Редактор Заказ .965 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушскэя наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород. ул,Гагарина, 101 ванных без добавления химиопрепаратов.Средние данные, полученные после 3опытов представлены в таблице. Кромеэталонных вирусов, исследовались экспериментально полученные варианты с различной иммуногенной активностью(4/1-Хабаровск, 5/11-Виктория, 5/1-В/Ленинград),После 2 пассажей в присутствии химиопрепаратов (ремантадина или адапромина) инфекционные титры всех изученных вирусов типа А (НИФ 1 и НЗМ 2) и типа В возрастают от 1,5 до 4,0 19 ЭИД 5 о.П р и м, е р 2. Полученными после 2пассажей в присутствии химиопрепаратов 15вирусами, а также исходными штаммамипроводят внутрибрюшинную иммунизациюбелых мышей, Животных иммунизируют подэфирным наркозом по 0,3 мл вирусами с одинаковым гемагглютинирующим титром 1:64, 20Титры антигемагглютининов в сывороткахкрови животных исследуют через 21 день после иммунизации, У вирусов, прошедших 2пассажа в присутствии химиопрепаратов,иммуногенная активность превышает иммуногенность исходных штаммов в 1,89-3,12раза,Формула изобретения .Способ повышения биологической активности вирусов гриппа, включающий введение противовирусного препарата в биологический материал, заражения его вирусом, инкубирование с последующим пэссированием в присутствии противовирусного препарата, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения инфекционности и иммуногенной активности вирусов, в качестве биологического материала используют куриные эмбрионы, а в качестве противовирусного препарата использую. ремантадин в дозе 2 мг на эмбрион для вируса гриппа А или адапромин в дозе 5 и на эмбрион для вируса гриппа В, при этом пассирование осуществляют 2-3 раза.