Способ получения смеси -аминокислот

1, 60074 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Респхйлин61) Дополнитсльиос и авт свил-ву 120 1306 22) Заявлено 15.11.76 (21) 2420789/28-1 с присоединением заявки 1 че М. 1 х Государственный комите Совета Министров ССС 23) Г 1 риорите 3 т 8 БОччетець Ъо 3) УДК 668,394,(088.8) 43) Опубликовано оо делам изобре и открьпнй45) Дата опубликования описания 28.03.7 2) Авторы изобретен Л. С, Слободяникова, М, И, фастовская, В, М, Белико и В. К, Латов рдена Ленина институт элементоорганических соединений А(7) Заявител 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СМЕСИ 1.-АМИНОКИСЛОТ Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения биологически ценных вешсств - смеси 1-аминокислот, нс содержащей пептидов, предназначенной для использования в пищевой промьциленностц, медицине, сельском хозяйстве.Псптиды в ряде случаев являются нежелательными примесями. В препаратах, прсдназцачснцых для парсцтсрального питания, оци 51 Вляютс 51 истоциком токсиности. Кромс то- ГО, ИСКОТОРЬ 1 С ГСПТИДЫ ЯВЛ 51 ЮТСЯ ИСТОЧНИКОМ горького вкуса в гидролизатах белков, употребляемых в пищсвой промышленности. Наличцс пептидов также нежелательно в средах, применяемых для выращивания вирусов и культур тканей.Известен фсрмснтативный гидролиз белков, ио которому гидролиз протекаст цс полностью и в результате ооразустся смесь аминокислоти пептидов.Для снижения содержания пептидов, в особенности высших, применяют очистку гидролизатов ца цонообменных смолах или проводят многоступенчатый Кислый и ферментативный) гидролиз смесью ферментов.Наиболее близким к изобретению по своейтехнической сущности и достигаемому эффекту является способ получения смеси аминокцслот, согласно которому гидролиз осуществляют иммобилизованными протеазами. Недостатком этого способа является невысокая степень гидролиза 80 - 90 о/о )Цель изооретения - получение смеси 1-аминокислот, не содержащей пептидов, предназначенной для применения в пищевой промышленности в качествс вкгсовых и питательных добавок к различным пищевым продуктам, в мцкробиологичсскОЙ и В мсдицинс, а также увсличснис выхода готового продукта.Это достигается тем, что пдролиз осугцсствляют фсрмсцтным препаратом Протосубтилиц Г 5 Х, выделенным из Вас 11 цв вЫ 1, иммобилизованном на органическом носителе - сополцмсрс стирола и малеинового ангидрида или на неорганическом носитслс - силохроме.Особенностью данного процесса является то,то прц гцдролизс ОслкОВОго гидролиза используется комплексный фермснтный прспа рат, производимый в промышленном масштабе. Используемыс для иммобцлизации носители (сополиср стирола и малеицового ангидрида, силохром) также легко доступны, дешевы и производятся в нашей промышлен ности. Процес иммобилизации нетрудоемкийи легко может быть осуществлен в промышленности. Процесс пдролза пептидов, содержащихся в белковых пдролизатах, может Осушествлят 1 ся (ак В динамисском, 30 так и в статическом, режимах, причемпроведение гцдролиза иммооилизовацным прс60074 1 О 25 30 1 о 50 60 Изл. М 314 Тираж 568 Подписное Заказ 264/13 Сапунова, 2 Типография, пр,паратом позволяет многократно испо,тьзовать фсрмснт. Так как гидролиз ведут только с помощью одного комплекного фермснтного препарата, то в отличие от известных способов, где используют при гидролизе последовательно ряд ферментных препаратов, процесс гидролиза пептидов значительно упрощается и удсшсвляется, При этом достигается глубина гидролиза 98-1-2%.Благодаря указанным особенностям предлагаемый способ позволяет просто и дешево получать смеси 1 -аминокислот, нс содержащую псптиды.П р и м с р 1 (динамический). В термостатированные (25 С) колонки (10 К 35 мм) помещают 100 мг иммобилизованного фермент- ного прспарата в 20 мл 0,25 М фосфатном буфере рН 7,4. Уравновешивают фосфатным буфером, а затем пропускают 100 мл 1%-ного раствора смеси аминокислот (75%) и пептидов (25%), выделенных из автолизатов пекарских дрожжей (аутолизин) в том же буфере со скоростью 15 - 20 мл/ч, и следят за нарастанием аминного азота по 2, 4, 6-тринитробензосульфокислоте, Теоретическое возрастание аминного азота при полном гидролизс пептидов рассчитывают как отношение содержания общего азота к аминному, взятое для гидролиза смеси аминокислот и пептидов. В результате получают 100 мл смеси 1.-аминокислот с содержанием последних 98+-2%.Г 1 осле проведения гидролиза колонку промывают 0,25 М фосфатным буфером и заполняют тем же буфевом, Многократное использование (до 10 раз) ферментного препарата не снижает способность его гидролизовать псптиды в белковых гидролизатах. В качестве фсрментного прспарата используют бактериальный комплексный ферментный препарат, выделенный из Вас 111 цз зцЫ 11 в штамм 103, иммобилизованный на разных носителях.Иммобилизация ферментного препарата.а) В смеси 1,5 г гилролизованного сополимсра стирола и малсинового ангидрида в 70 мл 0,25 М фосфатного буфера рН 7,4 растворяют 1,5 г ферментного препарата Протосубтилин Г 15 Х при комнатной температуре. Затем образовавшийся ферментполимсрпый комплекс разделяют на три части и добавляют такое количество СгС 1; в воде, чтобы получить металлсодсржа 1 цие ферментполимерныс комплекты (МФПК) с молярным соотношением Сг+" к элементарному звену сополимсра как 1:25; 1: 75 и 1; 100, Полученные таким образом МФПК тщательно промывают дистиллированной водой, затем ацетоном и высушивают в вакууме при комнатной температуре. Получают О,б - 1 г МПФК с выходом протеолитической активности 15 - 60%.б) В качестве носителя используют силохром с диаметром пор - 600 А. Получают иммобилизованный препарат в количестве 0,5 г, выход по активности составляет 0,2 - 0,5%.в) 0,2 г аминоалкилсилохзома с диаметром пор - 600 Л выдерживают в водном насыщенном растворе Сг+з при температуре 100 С в течение 24 и, затем образец высушивают. К высушенному образцу добавляют 5 мл 0,25 М фосфатного буфера рН ,4 выдерживают 30 мин и потом добавляют 0,05 г Протосубтилина Г 15 Х в 23 мл 2%-ного гидролнзованного сополимера стирола и малеинового ангидрида, медленно перемешивают на ма:- ,нитной мешалке в течение 2 - 3 ч. Полученный препарат промывают холодной ди"тиллированной водой, этиловым спиртом и ысушнвают в вакуумном шкафу при комнатной температуре, Получают 0,3 г иммобилизованного препарата с выходом протсолитической активности 0,1 - 0,2%.П р и м ер 2 (статический). В термостатированный стакан (25 С) с постоянным персмешиванием загружают 100 мг иммобилизованного ферментного препарата Протосубтилин Г 15 Х в 20 мл 0,25 М фосфатного буфера рН 7,4. Затем добавляют 20 мл 2%-ного раствора аутолизина и с интсрвалом в 1 мин проводят анализ аминного азота. Полный гидролиз достигается через 8 - 12 мин. Отделение фсрмснтного препарата от смеси аминокислот проводят как цснтрифугированисм, так и фильтрацией. Г 1 отеря активности фермснтно; о препарата составляет 6 -7% .Предлагаемый способ по сравнению с известными позволяет значительно проще и д- шевлс получать смеси 1.-аминокислот, не содержащие псптиды, при этом глубина гидро- лиза достигается 98 +2% .Аминокислотные смеси, не содержащие псптиды, полученные по предлагаемому способу, найдут широкое применение в здравоохранении в качсствс основы для лечебного питания., осооснно послеоперационных больных, в микробиологической промышленности в качестве заменителя дорогостоя 1 пих и нестандартных питательных добавок (кукурузный экстракт) и др. и в сельском хозяйстве. Формула изоорстенияСпособ получения смеси 1.-аминокислот путем гидролиза белковых гидролизатов в присутствии иммобилизованных ферментов, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью получения смеси 1.-аминокислот, нс содержащей пептидов, а также увеличения выхода готового про. дукта, гидролиз осуществляют ферментным препаратом Протосубтилин Г 15 Х, выделенным из Вас 111 пв зцЫ 1 Ь, им мобилизованном на органическом носителе - сополимерс стирола и малеинового ангидрида или на неорганическом носителе - силохромс.