Способ получения фитогемагглютинина

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Сое 1 Советсккх Социапистнческнх Республнн(43) Опубликовано об,09.77,Бюллетень33 ГесударстееахыЯ кемхтет Веаета Иелстреа СССР аа делан хэоаретеахЯ и еткрнтхЯ(45) Дата опубликования описания 03.10.77 М, Д. Луцик, И, Ю. Ниедра и С. М, Малей(72) Авторы изобретения Львовский государственный медицинский. институт и Олайнсквйзавод химреактивов(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ фИТОГЕМА 1 ТЛЮТИНИНА 1Изобретение относится к способам получения биологически активных веществ, которые могут найти применение в биологии и медицине в качестве стимуляторов митозов вкуль туре клеток, а также как стимуляторкровет- в ворения при введении в организм.Известен способ получения фитогемагглюгиниЮа из муки различных сортов фасоли пу:тем высаливания из раствора целевого про;дукта сульфатом аммония в кислом зна О чении рН, диализа, добавлечия солей и окончательным отделением, фитогемагглюГинина в ацетоне с последующей стерилизацией и концентрированием продукта.Однако такой способ не обеспечивает И высокой чистоты и активности целевого продукта.С целью повышения частоты и активнос-. ти целевого продукта по предлагаемому спо- собу в качестве источника сырья исполь Ф зуют сорта фасоли, имеющие белые почковидные бобы, из которых после экстракции выделяют фитогемагглютннин путем обработки раствора экстрактом щитовидной железы, затем осадок растворяют в воде, нейтра- М 2;.Лизуют, после диализа добавляют хлорио"тый кальций и хлористый марганец.Для получения митогенноактивных препаратов фитогемагглютининов пригодны сорта фасоли, имеющие белые почковидные бобы со средними размерами 16 х 8 х 5,2 мм и весом 400-500 г Ма 1 тыс. семян. Размол бобов фасоли проводят на гомоганизаторе типа кофемолки с достаточной пропускной способностью или на жерновой мель нице, Дпя хорошего выхода препарата размер частиц муки не более 0,5 мм.3 кг фасолевой муки экстрагируют 15 л, 1%-ного раствора хлориста"о натрия при постоянном перемешивании 1 ч. Иентрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость доводят до, рН 4 концентрированной соляной кислотой, и осадок :удаляют центрифугированием 20 мин. Надосадочную жидкость доводят цо рН 8 20%-ныл раствором едкого натра и осадок удаляют центрифугированием 18 мин. Надосадочную жидкость собирают и доводят до рН 6,5 концентрированной соляной кислотой.571267 Составитель С. МалютинаРедактор Л. Гончарова Техред А. Демьянова Корректор Л. Неболв Заказ 3150/4 Тираж 677 Поипианов11 НИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Рауаская иаб., д. 4/5 филиал 1 ШП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 К надосадочной жидкости добавляют 900 мл экстракта щитовидной железы. Смесь оставляют на 0,5 -2 ч после чего осадок собирают центрифугированием 15 мин ,при 3000 об/мин. Осадок отмывают 3 ра эа трехкратным объемом .холодного физраствора.Экстракт щитовидной железы получают путем размалывания аитовидных желез круп ного рогатого скота на мясорубкеэкстра- д гирования 2 ч трехкратным объемом физраствора и центрифугирования 15 мин при 3000 об/мин.Осадок, полученный на предыдущей стадии, размешивают в воде до объема 800- и 1000 мл и доводят до рН 3 концентрированной соляной кислотой. К раствору добавляют сульфат аммония из расчета 550 г/л и корректируют рН до, 3. Осадок собирают центрифугироввнием:15 мин при 6000 осмин,и Затем ос,адок размешивают в трехкратном, объеме воды, доводят до рН 3 и центрифугируют 15 мин при 6000 об/мин. Е полученной надосадочной жидкости добавляют сульфат аммония из расчета 400-450 г/л. 25 Осадок собирают центрифугироЬанием 20 мин при 6000 об/мин, растворяют его в 100 мл воды и доводят до рН 7. Полученный раствор диализуют против дистиллированной вооды 24 ч при 4 С. При этом часть белка 30 выпадает в осадок. К полученной таким образом суспензии добавляют иэ расчета на 100 мл 1 г хлористого натрия 200 мг хлористого кальция и 50 мг хлористого мар ганцапосле чего диализуют еше 12 ч % против 1 % хлористого натрия. По окончании диалиэа раствор центрифугируют для удаления небольшого осадка, стерипизуют фильтрованием через фильтр Зейца, стерильно фасуют во флаконы по 10 мг белка и лиофилизуют.Выход продукта 2-2,5 г иэ 1 кг сырья. Полученный фитргемагглютинин обладут митогенпой активностью, обеспечиваюаей 1не менее 150 метафазных пластинок на100 мкг фГА и вызывают балластное превращение не менее 75% лимфоцитов в куль- туре,Предлагаемый способ обеспечивает увеличение выхода продукта в 3-4 раза с высокой степенью чистоты и активностью продукта. формула изобретения Способ получения фитогемагглютинина путем экстракции фасолевой муки растяором хлористого натрия и последующим высаливанием сульфатом аммония и диализом, о т л и ч а ю ш и й с я тем, что,с целью повышения чистоты и активности целевого . продукта, в качестве источника сырья исполь зуют сорта фасоли, имеющие белые почковидные бобы, из которых после экстракции выделяют фитогемагглютинин путем обработки раствора экстрактом щитовидной желе эы, затем осадок растворяют в воде, нейтрализуют после диализа добавляют хлористый кальций и хлористый марганец.