Способ определения зоокумарина в тканях животных

ц 549743 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 12.0с присоединением вки -Государственный комите 23) Приоритет - (43) Опубликован Совета Министров СССоо делам изобретенийи открытий 05,03.77. Бголлетеньвания описания 30,05.7 16-0188.8)) с РИНА Б ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗОО В ТКАНЯХ ЖИВОТНЫХ Изобретение относится к хческпм методам определения зо р органах и тканях животных.Целью изобретения является способ определения зоокумарина в тканях животных.Эта цель достигается тем, что,проводят гомогенизацию ткани, экстракцию хлороформом, очистку экстрата на колонке окиси алюминия, элюирование,вещества ацетоном с 2%-ным раствором гидроакиси натрия, хроматографирование в закрепленном гипсом тонком слое, например силикагеля, в системе гексан - ацетон (2: 1) и выявление зоокумарина диазонированным 2,4-дихлоранилином и парами аммиака.Способ осуществляют, следующим образом.Для определения зоокумарина 25 г гомосенизированного образца (мясо, кровь, патматериал и ткани животных);помещают в колбу Зрленмейера емк. 250 мл,;куда вносят 10 мл 1 н. серной кислоты, Содержимое перемешивают, добавляют 75 мл хлороформа и встряхивают на механическом встряхивателе 40 минут. Затем в колыбу,вносят через фильтровальную воронку неоольшими порциями (во избежание комков) 65 г сульфата натрия, Выделившийся хлороформный экстракт фильтруют в колбочку емкостью 100 мл через тампон стекловаты (или обычной ваты). Извлечение препарата повторяют еще раз, используя 50 мл хлороформа и встряхивая образец 15 минут.Экстракт фильтруют через ватный тампои,присоединяя,к,первой фракции, а затем про пускают через колонку, которую готовят следующим образом:,в нижнюю часть колонки помещают слой ваты (1 см), вносят 10 г окиси алюминия и промывают 20 мл хлороформа.После того, как весь экстракт опустился до 1 в адсорбента, колонку промьквают 100 мл чистого хлороформа и 20 мл ацетона. Зоокумарин элюируют 50 мл смеси ацетона и 2% раствора гидроокиси натрия (47;3). Элюат собирают в фарфоровую чашку10, добавляют 0,2 мл ледяной уксусной кислоты и выпарнвают на кипящей водяной бане, Остаток растворяют в 0,5 мл ацетона и наносят микропипеткой или пипеткой Пастера на пластину типа Силуфол или с силннагелем КСК 20 (14 г адсорбента 100 - 120 меш, смешиваютс 1 г гипса, 40 мл воды и смесь наносят на ,пластини 9 Х 12 см в 0,5 мм). Одновременно готовят свидетели, внося в фарфоровую чашку 10 - 20 мкг вещества (0,5 - 1 мл рабочего раствора зооиумарнна). Образцы наносят на пластинки в следующей последовательности: сзидетель (5 мкг), образец (1 повторность), образец (11 повторность), овидетель (10 мкг).Размер пятен не должен превышать 0,5 см.30 Места нанесения проб располагают на рас549743 А Х =Формула изобретения Составитель С. МалютинаТекред Л. Кочемирова Корректор И. Симкииа Редактор В. Трофимов Заказ 276/932 Изд. Юо 481 Тираж 1054 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Тип. Харьк. фил. пред. Патент стоянии 1,5 - 2 см от края пластинки, и они не должны погружаться,в растворитель. В камеру для хроматографирования (эксикатор) наливают 60 мл смеси тексана и ацетона (2: 1) и через 20 мин помещают пластинку в вертикальном положении. Хроматотрафирование проводят,при комнатной температуре не ниже 20 С. Камеру герметично закрывают, и после того как растворитель поднимается на высоту 8 - 9 см, пластинку вынимают, отме чают фронт растворителя и,помещают в сушильный шкаф при 105 С на 3 минуты. Затем пластинку опрыскивают из,пульверизатора хромогенным реагентом (смешивают 25 мл 1% раствора нитрита натрия с 25 мл насы щенного раствора 2,4-дихлоранилина в 0,33 и соляной кислоте), вновь высушивают при тех же условиях и,помещают в эксикатор над ларами аммиака на 1 минуту. Зоокумарин проявляется в виде коричневых пятен на желтом 20 фоне,с К 1=0,4 - 0,5,в тонком слое силикагеля и с И=0,29 - 0,35 на силуфоле, Количество пестицида в пробе определяют сравнением окраски и площади пятна свидетелей и образца. Концентрацию зоокумарина в образце вы числяют,по формуле: где Х - содержание зооцида в исследуемой,пробе, в мг/кг,А - содержание зоокумарина в анализируемой навеске, мкг,Р - вес пробы, г.Изобретение имеет социальное и народнохозяйственное значение при диагноствке ипредупреждении отравлений сельскохозяйственных животных. Способ определения зоокумарина в тканях животных, о т л и ч а ю щ и й,с я тем, что проводят гомогенизацию ткани, экстракцию хлороформом, очистку экстракта на колонке окиси алюминия, элюирование,вещества ацетоном с 2% -ным раствором гидроокиси натрия, хроматотрафирование в закрепленном гипсом тонком слое, например силикагеля, в системе гексан в ацет (2: 1) и выявление зоокумарина диазонированным 2,4-дихлоранилином и парами аммиака.