Способ выделения уридина

1 5 Б 758 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Сооз Советскии Социалистических Республик(23) Приоритет Государственный комите света веиннстрев СССРпо лелем нзобретений н открытий Опубликовано 30.05,76. Бюллетень ЬЪДата опубликования описания 22.06,76) Авторы изобретения У. Я. 1 т 1 икстайс и И. Я. Штернбергафилиал Всесоюзного ордена Трудового Красного Зн исследовательского института химических реактивови особо чистых веществ н 4) СПОСОБ ВЫДЕЛЕ УРИДИ НА Изобретение относится к области выделенуя нуклеозидов, а именно к усовершенствованному способу выделения уридина, который применяется в биологических и биохимических исследованиях,Известны способы хроматографического ихимического выделения уридина из уридинсодержащих растворов.Хроматографически уридин выделяют на сефадексе, катионитах, активированных углях,полиакриламидном геле, на этилцеллюлозе.Хроматографические способы выделения являются малопроизводительными и трудоемкими,Известно вдинсодержащмалораствори ыделение уридина из водных уриих растворов осаждением в видемых бариевосвинцовых солей. соб взаимного разделен из водных растворов еиновой кислоты (РНК) лей. При этом уридин альциевой солью цитирастворимости кальциеитидина. Выделение чиособом невозможно. еления уридина из водих растворов путем сес использованием хлои ионообменной смолы. Известен также спо ния смеси нуклеозидо гидролизата рибонукл в виде кальциевых со осаждается вместе с к дина из-за сходной вых солей уридина и ц стого уридина этим сп Известен способ выд ных уридинсодержащ лективного осаждения ристого цинка, щелочи(71) Заявитель Латвийскинауч Несмотря на высокуо эффективность осаждения (91,3 - 99,3%) после обработки амберлитом для удаления ионов цинка выход уридина достигается только 85 Я,.5 Сложность проведения процесса по известному способу заключается в продолжительности процесса и трудоемкости разделения уридина от примесей цинка. Для выделения уридина по известному способу необходимо обра батывать (фильтровать, обрабатывать ионнообменной смолой, элюировать, упаривать) большие объемы разбавленных растворов (1000 л на 1 кг уридина). Продолжительность процесса связана также с приготовлением 15 ионнообменной смолой и с последующей еерегенерацией. Осаждение уридина по известному способу достигается только большим избытком солеобразующего агента - хлористый цинк добавляют в большом избытке 20 (10: 1 в весовом пли 20: 1 в малярном соотношении), При рН 7 - 8 хлористый цинк гидролизуется с образованием труднорастворимой в воде гидроокиси цинка, которая из водных растворов осаждается вместе с уриди ном.С целью увеличения выхода и упрощенияпроцесса выделения по предлагаемому способу в качестве солеобразующего агента используют гидрооснси или алкоголяты щелоч ных металлов и процесс ведут в низших515758 50 55 Составитель С, ЧеРноваТекред М. Семенов Корректор Т, Добровольская Редактор Т. Никольская Подписное Тираж 575 Изд. ЛЪ 1368 Заказ 1356/14 Типография, пр. Сапунова, 2 спиртах, а для осаждения соответствующих солей добавляют менее полярные, чем спирты, органические растворители (например, диэтиловый эфир, ксилол, гептан, гексан) с последующей обработкой кислотами и перекристаллизацией известным способом.Предлагаемый способ позволяет выделить хроматографически чистый уридин с хорошим выходом также гидролизатов РНК после выделения яденозина, гуанозина и цитидина,В связи с тем, что гидроокиси и алкоголяты щелочных металлов обладают большей основностью по сравнению с металлами 11 и 17 групп периодической системы, уридин легко образует соли со щелочными металлами, Для этого нет необходимости применять избыток осаждающего и солеоорязующего агентов,Алкоголяты и гидроокиси щелочных металлов растворпмы в низших спиртах и не осаждаются совместно с уридином при добавлении ацетона, диэтилового эфира и других менее полярных органических растворителей.Пример 1. В 10 .1 л метилового спирта, содержащего 1,0 г урпдина, растворя 1 от 0.,5 г едкого натра, добавляют 50 мл диэтилового эфира. Натриевую соль уридина сразу после отделения растворяют в 5 мл дистиллированной воды, раствор подкисля 1 от концентрированной серной кислотой до рН 3 - 5, добявля 1 от 50 мл ацетона и отфильтровывгпот сульфат натрия. Фильтрат упаривают до образования густой сиропообразной массы, для кристаллизации добавляют этиловый спирт. Получают 0,97 г (97,%) хроматографичсск 1: шстого уридина, т. пл. 163,5 - 166.Ру 0,66 (%1 и 1 о ГЛ 254, соотношение изопропилового спирта, концентрированного аммиака и воды 7: 1: 2) .Содержание основп-го вещества 98/о.П р и м е р 2. В 1 О:л (0,41 моль) раствора уридина в мет 11 лово.,: спирте растворяют 0,01 моль метилатя . птия добавляют 50 мл ацетона и отфильтрс зывяют литиевую соль уридина, которую сразу после отделения растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Далее обрабатывают по примеру 1,Получают 0,98 г (93%) хроматографически чистого уридина, т. пл. 163,5 - 166 С.Р 0,67 (51101 о Л 1 254, соотношение изопропилового спирта, концентрированного аммиака и воды 7: 1: 2).Содержание основного вещества 98%.П р и м е р 3. 150 мл гидролизата РНК (после отделения гуанозина, аденозина и цитидина сернокислого), содержащего 7,3 г уридина, разбавляют 750 мл метилового спирта, добавляют 5 г активированного угля, перемешивают и фильтруют. К фильтрату добавляют насыщенный раствор гидроокиси натрия в ме 5 10 15 25 30 35 40 45 тиловом спирте до рН 11 - 12, обрабатываю 1активированным углем и фильтруют. К раствору добавляют 2 л ацетона и отделяют натриевую соль уридина, которую сразу послеотделения растворяют в 25 мл дистиллированной воды, подкисляют до рН 3 - 5, добавляют активированпый уголь и фильтруют,Фильтрат упаривают. Далее процесс проводятпо примеру 1.Получают 6,45 г (90%) хроматографически чистого уридина; т. пл. 163 - 166,5 С.Р 0,66 (Я 1 и 1 о ЬЪ" 254, соотношение изопропилового спирта, концентрированного аммиака и воды 7: 1: 2) .Содержание основного вещества 99 о/о,П р и и е р 4, В 50 мл этилового спирта, содержащего 1 г уридина, растворяют 0,48 ггидроокиси калия и добавляют 50 мл ксилола,отделяют калиевую соль уридина и далее обрабатывают по примеру 1.Получают 0,89 г (89% ) химически чистогоуридина; т. пл. 163,5 - 166 С.Р; 0,66 (Япало ГЛ 254, соотношение изопропилового спирта, концентрированного аммиака и воды 7: 1: 2) .Содержание основного вещества 98,5%,П р и м е р 5. К 55 мл 85%-ного пропилового спирта, содержащего 1 г уридина, добавляют насыщенный раствор пропилата натрияв пропиловом спирте до рН 11 - 12 и 50 млгептана. Далее обрабатывают по примеру 1.Получают 0,89 г (89%) химически чистогоуридина; т, пл, 163,5 - 166 С.Р 0,67 (Яио 1 Л/ 254, соотношение изопропилового спирта, аммиака и воды 7: 1: 2).Содержание основного продукта 98%.П р и мер 6. К 50 мл этилового спирта, содержащего 1 г уридипа, добавляют насыщенный раствор этилата калия в этиловом спирте до рН 11,0 - 12,0 и добавляют 50 мл гексана. Отделяют калиевую соль уридина и далееобрабатыва 1 от по пример 1.Получают 0,90 г (90/,) химически чистогоурпдина; т. пл. 163,5 - 166 С,Р 1 0,66 (Я 101 о 1 Лг 254, соотношение изопропилового спирта, аммиака и воды 7: 1: 2).Содержание основного вещества 99/о. Формула изобретения Способ выделения уридина из уридинсодержащих растворов путем осаждения основными соединениями металлов в виде солей, отлич а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода и упрощения процесса, в качестве основпых соединений используют гидроокиси или алкоголяты щелочных металлов и процесс ведут ь пизшпх спиртах с добавлением менее полярных, чем спирты, растворителей.