Способ получения фибринолитического фермента

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН Ия К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУп 11 493504 Союз Сооетскил Социалистических Республик(23) ПриоритетОпубликовано 30.11,75. Бюллетень44Дата опубликования описания 09,06.76 12 с 1 13,10 51) М. К Гасударственный комитет Совета Министров СССР(088.8) ао делам изобретени и открытийАвторыизобретения Н, С. Егоров, Н, С, Ландау и Т. А. Прийдак Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им, М. В, Ломоносова(54) СПО ОЛУЧЕНИЯ фИБРИНОЛИТИЧЕСКОГО ф ЕРМЕНТА 2 иологиче примене Изобретение относится к микробской промышленности и может бытьно в медицине,Известен способ получения протеолитического фермента, обладающего фибринолитической активностью, заключающийся в том, что культуральную жидкость Азрегр 11 уз огухае В 1273 опускают через колонку с анионитом, сырец фермента получают путем осаждения ацетоном, осадок растворяют в воде, осаждают примеси, добавляя соли тяжелых металлов, фильтрат диализируют и лиофилизируют.С целью получения высокоактивного фермента в качестве продуцента используют культуру Мосагс 11 а зрес 1 ез штамм 1 или культуру Мосагйа 1 гапяа 1 епз 1 з штамм 19, или культуру Ргоас 11 потпусез гцЬег штамм 26.Способ осуществляют следующим образом.П р и м е р 1. В синтетическую среду СР(глюкоза 2%, КХОз 0,1%, К;НР 04 0,005%, Мд.04 0 05%, ХаС 0 05%, СаСОз 0 1%, Ре 304 10 мкг/л) после стерилизации вносят 5% по объему трехсуточного жидкого посевного материала Мосагйа зрес 1 ез штамм 1, выращенного на среде МПБ с глюкозой, Культивирование проактиномицета осуществляют глубинным способом в колбах на 750 мл со 100 мл среды на качалках при 30 С в течение 3 суток. По истечении этого времени культуральная жидкость содержит 2081 ед/мл фибринолитического фермента, для выделения которого применяют дробное высаливание сернокислым аммонием. Для этого в культуральную жидкость вносят (ИН 4)504 в кон центрации 0,2 насыщения. Выпавший осадокудаляют фильтрованием, а оставшийся фильтрат донасыщают (г 4 Н 4)2.04 до 08 насыщения и оставляют для более полного высаливания на 24 час при 4 С,10 Выпавшин осадок, содержащий фибринолитический фермент, растворяют в исходном объеме дистиллированной воды и получают раствор с активностью 1997 ед/мл, что составляет 96% от активности культуральной жид кости. Затем раствор фермента диализуют втечение 24 час при 4 С против 0,1 М трисбуфера при рН 7,4 с 0,005 М СаС 12. После диализа актизиость ферментного раствора составляет до 90% исходной активности, а пос ле лиофильного высушивания раствора получают 950 мг сухого порошка с 1 л культуральной жидкости со специфической фибринолитической активностью, равной 14264 ед/мг белка.25 П р и м е р 2, В синтетическую среду Гудзина (глюкоза 2%, глицерин 4%, /-аспарагин 0 5%, Ка 2 НР 04 0,4%, КН 2 Р 04 0,3%, Мд 504 0,1%, натрий лимоннокислый трехзамещенный 0,25%, ГеС 1, 10 мг/л, тиамин 400 мкг/л, био- ЗО тин 2 мкг/л, пантотеновая кислота 1000 мкг/л)493504 Предмет изобретения Составитель С. Малютина Техред 3. ТараненкоКорректор А. Степанова Редактор М. Дмитриева Заказ 928/7 Изд. Юо 2042 Тираж 529 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 после стерилизации вносят 5% по объему трехсуточного жидкого посевного материала Хосагйа 1 гапзуа 1 епз 1 з штамм 19, выращенного на среде МПБ с глюкозой. Культивирование продуцента осуществляют в течение 3 суток в колбах на 750 мл со 100 мл среды на качалках при 30 С, По истечении этого времени культуральна я жидкость содержит 2239 ед/мл активности, Для выделения фермента используют дробное высаливание сернокислым аммонием с конечным насыщением в 0,8. После растворения осадка фермента получают раствор с содержанием 2059 ед/мл, то есть 92% активности культуральной жидкости, Для удаления низкомолекулярных примесей раствор фермента диализуют против трис-буфера рН 7,4 с 0,005 М СоС 12. После диализа активность ферментного раствора составляет 85% исходной активности, а после лиофильного высушивания с 1 л культуральной жидкости получают 800 мг сухого порошка со специфической фибринолитической ак тивностью, равной 10653 ед/мг ферментногобелка. Способ получения фибринолитического фер 10 мента путем выращивания проуцента на среде, содержащей источники углерода, азота иминеральные соли с последующим выделением и очисткой, отличающийся тем, что, сцелью получения высокоактивного фермента,15 в качестве продуцента используют культуруЫосагйа зрес 1 ез штамм 1 или культуру Йосагйа 1 гапзча 1 епз 1 з штамм 19, или культуруРгоасЫпогпусез гцЬег штамм 26,