Способ получения гуанозин-5-монофосфата

щ -ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(51) Ч, Кл Й 51/54 присоединением заявки Ы Государственный комитет Совета Министров СССР 3) При 1 тет(088.8) Опубликовано лам нзабретении открытий Дата опубликования описания 16.0а, У. Я, Микстраутзелеинений АН ССвого Красного ских реактиво веществ СРЗнав и Латвийскии ни научнообо чистых т высокомолекулярных сое Всесоюзного ордена Труд вательский институт химич химически4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГУАНОЗИНОфОСФА Изобретение относится к усовершенствованному способу получения гуанозин-монофосфата, который используется в биологических, биохимических и медицинских исследованиях,В литературе известно получение гуанозин-монофосфата путем фосфорилирования гуанозина без защиты 2,3-гидроксильных групп, зак:цочающийся в том, что к реакционной смеси добавляют гилроокись натрия, устанавливают рН 3 и осаждают метанолом нуклеотидный материал, основную массу которого составляет натриевая соль гуанозин-монофосфата, Далее нуклеотидную массу разделяют при помощи иопообменцой хроматографии,Недостатком известного способа является сложность выделения и недостаточная чистота продукта при осаждении метанолом, связанная с тем, что растворимость натриевой соли гуанозинмонофосфат близка к растворимости натриевых солей гуанозинли- и полнфосфатов, и при осаждении метанолом из реакционной смеси эти соли осаждаются вместе. Для получения чистого гуанозинмонофосфата требуется дополнительная очистка на ионообменных материалах, которая влечет за собой большие затраты ионообменного материала и рабочего времени.Целью предполагаемого изобретения является обеспечение чистоты целевого продукта и упрощение процесса. Способ заключается в том, что после фосфорилировдния гуацозпна в реакционную смесь вводят соединения кальция, устанавливают рН 0,5 - 2 и избирательно осаждают примеси и целевой продукт изменением соотношения этилового спирта к реакционной смеси в интервале 1: 2 в : 1.Прн соотношении этилового спирта к раствору нуклеотилного материала 1: 4 - 1: 2 осаждают кальциевые соли гуанозццдц- и полифосфатов, при увеличении соотношения спирта к раствору 6: 1 - 10: 1 кальциевую соль гуацозпнмоцофосфата.Изучение растворимости солей гуанозццфосфатов в водных и волцооргаццческцх растворах показало, что рдстворпмость кальциевых солей гуацозцнфосфатов ц фосфорцоц кислоты сильно отлнчаотся в сппртоволцосоляцокцслых средах.Выбор рН в интервале 0,5 - 2 обусловлен тем, что при таких условиях гуанцц, гуанозцн и неорганические соли спиртом не осажлаются. В более кислых средах затрулняется осажление гуанозинфосфатов, в менее кислых растворах нарушается избирательность осаждения,Применением сослшснпй кальция в качестве источника катионов солей гуанцловых кислот упрощается проведение процесса, найденные соотношения спирта к раствору нукле(1) Заявител Институ филиал исслед493474 ЦППИП 1 Госуа"с;",:сгоо,:тсО С.Оо .",:,.", О, г.г.3 ос;33:3 со,."с . . , :Ос:,с, /1,-35. ГЧ;с,О, ;о.,отидного материала обеспечивают избирательное отделение примесей.14 збиратс/ьнос осаждсшс гусиюзинмопофосфата в виде кальциевой соли при рН 0,5 - -2 и найденных соотношениях спирта к раствору позволяст получить гуанозипмопоросфат из реакционной смеси с выходом 75 80 О/О и выс 01 юй степспи чистоГы (содержа 1 с ОсновиОГО вещества 95 - 99 О/О ) . П р и м е р 1. Реакционную смесь, полученную при фосфорилироваппи 2,84 ." (10,0 сс моль) гуапозипа 2,76 мл (30,20 ммоль) хлорокисью фосфора в 18 мл трпмстилфосфата, иромываот 40 мл афира и нейтрализуют водой суспспзисй пдроокисп кальци 5. 1 о нуклсотпдпому материалу смесь содсрэкит 77/О гуапозин-монофосфата; 11,6 О/О гуапозин дифосфатоэ;4,9 О/О полифосфатов и 6,5 О/О гуяпозша прп мнОГОкГэятно 5 изоыт 1;,е Соргапсекифосфатов. Нуклеотдный материал полностью осаждают 10-кратным объемом сирта пс отношсншо к раствору, 11 олучсипую смесь расТВОГэяют В 50 л 0,1;. Соляной кислоты. Кальпевыс со:и гуяпозиндифосфатов и полифосфатов выделяют добавлением 15 мл спирта. Кальциевую соль гуанозинхОпофосфата выдсляот добавлением 350 мл спирта, При последующем псреосаждснпи продук;а пз со- ЛЯИОКИСЛОГО ЭЯСТВОГЭЯ 1 ОЛУЧЕПЯ КЯЛЬЦИСВс 5 соль гуанозпп-мопофосфата с ч;стотой болсс 95 /О (Вы.ход 78 О/О ); Г 1 э 1 1 е)эиодятпом Окислении обнару жено 99 О/О гуанози 1:Онофосфстс. ПГэод" 1,т хэо 1 атОГ 1 эя 133 ески и э/1 скт 1 эофоэс 1 ичсс 1 1 Одп 0130:сп.Весовая акстщКция 1.осс 266О "1- 111,4 10 О смЬо,ь.ГГ р и м с р 2. Реакционную смесь, полученную и;эи фосфорилировании 2,5 г (8,81 ммоль гуанозапа 3,7 мл (2691 ммо;ь) ппрофосфорилтстрахлопида В -17 мл яцсгопитрила проМЫБЯ 10 Т ЗфпГЭОЭ 1 (150;Л /, ОСЭа 01 ЭСВОР 51 с101 В о Г /с,иП ВО,ь. Г 1 43(30 ПсьО иа 1 ИЯ р Н Гэ с с г 30 р , го вод 5до 0,5. К Гэ асВоэ 3 .ООЯГ 3/151 ЮТ 20 1/ 1 П. ГЭЧСВОГс Х/1 О;ЭИС ГОГО кальци 51. Вьсшс ИГод 1 г ы фосфоэилп)эОВяии 51 Г 3 "1:ОЗИ.с ОСс;дсиог 20 МЛ Спирта. Гс,яЛЫисвуо соль гуапозип-моно 1 осэата выдс;яют добя 13 ЛС 1 ИСЗ 300 З 1/1 СППГЭТ ся. 111 ЭИ ПСГСдуО- шсм псрсосяждс 1 И 1 И ПГэод 1 тя из 0,1 н. сОля 1 Окисло 0 ГэсствОГЯ ИО"сна кс.,ьИсвая согь 1." а 1 О З И 1- 0 ."10 П 0 Э 0 С ,с Т с 1 С 1 И С Т 01011 О 0; С СО,О/;) /О Гзьход/ О / , 3 эи псГэподстноз Ок 1:с;сипи Оопяэгжспо 99,/ 1 а 1 эзппмон 031 эос 1 стя..ЦстОь Цс/1 сВ 0 1 эО, 11 с, 1 ООЦосс Вс;",1 Бп 1 3 с"свии сос и 1.н,1 и 1 альп 51 и 130,0 , в кя сствс сшртя и 1 эльзуот зпловыйСИИГЭТ И;1 ЗОИР с, СЛ 1.; 0 ОСс жлг 10 П; ИМЕСИ И30 целевой ПГэо;хкт пзэс.03 с:1 соспошс:шй зти"О 00 с;ИР .; Э ТВИ,О. 0 О "г Я1 ис 1 яП ГЕГЭВ,ТС 1, 2 . О . 1,ЮСОО И-;;Ш ИС 1 С33 и 1 С.3:,осойа 1 ОВ иОИО;я: 5:;бэа 3-сп:с, к СО.1503 СОУ 1;ЯСТ 10:" ".,.Лоо. 1 Э С МЭо - .Осчо по; . 1 , л ; я к; сц и й ссм,г Эг .с",: 1 1 Вс, О0 П 0