Гипоталамический рилизинг-фактор гормона роста и способ его получения

О П И С А Н И Е (и 1 480418ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Говотслик Социалчстинеских Республик(5 ) М. Кл, А 611 с 17/00 24,07.7 1 ением заявки Ме рисо Государственнын комите Совета Министров СССР па делам изобретенийи открытий(088,8) публиковано ата опублик 2) Авторы изобретент. Ут Институт экспериментально 1) Заявитель к инологии и химии го ов ЗИНГ-ФАКТОР ГОРМОНА ПОЛУЧЕНИЯ(54) ГИПОТАЛАМИЧЕСКИЙ РИ РОСТА И СПОСОБ Ебретение относится к гормональным пр дложено вещество, циальной литератур амический рилизинг редставляющий соб лпцинамид структур час к медицине в тепаратам.ранее в патентной е не описанное, - ги-фактор гормона роой пироглутамил-се- ы иост ПрНеС СНо СНеОН 1 О - С СН - СО - %1 СН СО М 4 СН СОГ 1 редложен способ получения гипоталамического рилизинг-фактора гормона роста, ранее в литературе также не описанный, который заключается в том, что для получения конечного продукта в химически чистом виде гипоталамические фрагменты крупного рогатого скота экстрагируют кислотой, например, уксусной, хроматографируют на катионообменнике, затем на органическом молекулярном сите в водном растворе или системе органических растворителей, например, аммонийно-ацетатной, с последующей лиофилизацией, При этом в качестве катионообменника используют, например, КМ-целлюлозу, а в качестве органического молекулярного сита используют, например, сефадекс Ги Г,Гипоталамический трипептид структуры -пироглутамил-серил-глицинамид стимулирует освобождение из гипофиза гормона роста у человека и некоторых животных и назван рилизинг-фактором ростового гормона. Этот трипептид в отличие от самого гормона роста представляет собой сравнительно несложное и, по-видимому, лишенное видовой специфичности соединение, которое может заменить гормон роста во многих сферах его применения. Гипоталамический трипептид проявляет высокую биологическую активность при испытании его как 1 п ч 11 го, так и 1 п Юо. Трипептид в пико-граммовых дозах при инкубации 1 п и 1 го с элюированными половинками деногипофизов увеличивает освобождение ормона роста в среду. Освобождающийся в среду ростовый гормон определяют с помощью электрофореза и полиакриламидном геле. Опыты 1 п ч 1 го свидетельствуют о ярко выраженном специфическом эффекте этого трипептида: он действует непосредственно на гипофиз. Предложенное вещество может найти применение как для дифференциальной диагностики, так и для лечения заболеваний, связанных с недостаточностью гормона роста в организме. Кроме того, оно может быть использовано для стимуляции анаболических процессов в организме человека при лечении еэндокринных заболеваний, связанных с наущением трофических процессов. Трипептид480418 Составитель С. ЩеневаТехред Т. Миронова Корректор Н. Лебедева Редактор Л. Тюрина Заказ 3062/2 Изд.1867 Тираж 559 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 не токсичен в остром и хроническом опытах в дозах, во много раз превышающих биологически активную дозу, Эксперименты, проведенные с помощью хроматографии и электрофореза, показали, что выделенное вещество является индивидуальным чистым пептидом. На основании определения аминокислотного состава и М-концевой аминогруппы и данных, полученных в результате последовательных реакций расщепления пептида по методу Эдмана, а также сопоставления с известными литературными данными по структуре рилизингфакторов других гормонов, установлена структура выделенного трипептида-пироглут- амил-серил-глицинамида Н С СНе СН.ОНО =С СН - СО - 3 Н - СН - СО - ХН - СН, - СО - ЯНЗНПр имер. Получение рилизинг-фактора гормона роста, 5000 г свежезамороженных гипоталамических фрагментов крупного рогатого скота гомогенизируют в охлажденном до - 15 С ацетоне и получают ацетонированный порошок ткани, который затем обрабатывают 2 М уксусной кислотой, Лиофилизированный уксусно-кислый экстракт подвергают гель-фильтрации на волокне с сефадексом Г. Активную фракцию с К 1 0,63 - 0,53, элюируемую 0,005 М аммонийно-ацетатным буфером рН 4,5, смешивают в стакане с КМ- целлюлозой, суспензированной в этом буфере. Буфер отсасывают на воронке Бюхнера, целлюлозу промывают дважды этим буфером и аммонийно-ацетатным буфером рН 6,5. Активный материал элюируют с катионообменника 0,1 М ХаС 1 рН 6,5 и лиофилизируют, после чего освобождают от солей, пропускают через колонку с сефадексом Гв 0,005 М аммонийно-ацетатном буфере рН 4,5. Затем активную зону подвергают хроматографическому разделению на колонке с КМ-целлюлозой в условиях ступенчатой элюции. Активный материал адсорбируют па колонке из 0,005 М буфера рН 4,5, элюируют 0,1 М МаС 1 рН 6,5 и лиофилизируют, Сухой препарат подвергают дважды гельфильтрации в водб ном растворе на волокне с сефадексом Г,а затем с сефадексом Г, Активный материал лиофилизируют.В составе активного препарата, элюируемого с колонки с сефадексом Гс Ц 0,7, об наружены с помощью автоматического аминокислотного микроанализатора ТесЬп 1 соп три аминокислоты в эквимолярных соотношениях: серии, глутаминовая кислота и глицин.Дансил-хлоридный метод показал, что И-кон цевая аминокислота пептида блокирована. Предмет изобретения1. Гипоталамический рилизинг-фактор гормона роста, представляющий собой пироглут амил-серил-глицинамид структуры СН,ОН1О =С СН - СО-ЗН- СН - СО - М 4 - СН, - СО - %125 % 2. Способ получения гипоталамического рилизинг-фактора гормона роста, о т л и ч а ющийся тем, что, с целью получения конеч ного продукта в химически-чистом виде, гипоталамические фрагменты крупного рогатого скота экстрагируют кислотой, например, уксусной, хроматографируют на катионообменнике, затем на органическом молекуляр ном сите в водном растворе или системе органических растворителей, например аммонийно-ацетатной с последующей лиофилизацией.3. Способ по п. 2, отличающийся тем, 40 что в качестве катионообменника используют,например, КМ-целлюлозу.4. Способ по п, 2, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что в качестве органического молекулярного сита используют, например, сефадекс Ги 45 Г.