Способ совместного получения протамин-сульфата и дезоксирибонуклеиновой кислоты

(32) Приоритет 51) л. С 07 д 7/00 С 070 51/5 Государственный комитет Совета Министров СССР ло делам иаобретени и открытий(088.8) ата опубликования описания 18.09.7(71) Заявит ститут биологически активных веществ Дальнево научного центра АН СССР ЧДЯй 54) СПОСОБ СОВМЕСТНОГО ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТАМИН 4 УЛЬфАТА И ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ Изобретение относится к области медицины.Известен способ получения протаминсульфата из молок лососевых рыб, заключающийся в том, что молоки варят, измельчают, обрабатывают ацетоном, экстрагируют серной кислотой и водой, экстракты объединяют, нагревают до 80 С и очищают путем добавления активированного угля, затем раствор обессоливают при помощи ионообменных смол и ацетоном осаждают целевой продукт из элю. ата,Известен также способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты, заключающийся и том, что молоки измельчают в присутствии этанола, удаляют спирт, к остатку прибавляют холодную воду и кристаллический хлористый натрий, массу нагревают до 75 - 80 С, отфильтровывают осадок и выделгиот целевой продукт из фильтрата осаждением этанолом.Предлагаемый способ позволяет одновременно получить протаминсульфат и дезоксирибонуклеиновую кислоту, Это достигается тем, что измельченнье молоки, например, лососевых рыб экстрагируют раствором хлористого натрия и выделяют дезоксирибонуклеиновую кислоту из экстракта известнь 1 мп приемами, а отработанные молоки экстрагнруют серной кислотой и выделяют протамннсульфат известными приемами,П р имер, Отделение РНК. 1 кг свежемороженных молок кеты с содержанием в них протаминсульфата 7,5% и ДНК 21% измельчают в мясорубке, загружают в экстрактор с 5:.ег:алкой, заливают 3 л 0,15 М раствора хлористого натрия и тгцательно перемешивают в течение 10 мин при 0 - 10 С.Извлечение. Сливают декантацией и промывку проводят еще дважды. Гомогенат про пускают через проточную центрифугу и отделяют РНК.Получение ДНК, После отделения РНК остаток переносят в экстрактор, заливают 5 л 2 М раствора хлористого натрия и перемеши вают в течение 30 мнн при той же температуре. К раствору добавляют равный объем этаьола (1; 1) и центрпфугируют. Осадок, содержаг,нй Д 11 К, для очистки смешивают в соотношении 1: 1 со смесью хлороформ-изоамило вый спирт (24; 1) и перемешивают в течение15 мин прн 0 - 10 С. Очистку ДНК проводят трижды. Смесь центрифугируют. Водную фазу оорабатывают этанолом в соотношении 1: 1 и осаждают Д 1 К. Для удале ия хлори стого натрия ДНК трижды (по 500 мл) промывают 70%-ным раствором этанола, затем 500 мл 96%-ного э;енола. Сушку ДНК ведут смесью спирт-эфир (1: 1). ДНК осторожно пе.еносят 11 а эмалированный противень и су 30 ц:а в сушильном шкафу прп 30 С,473720 Составитель С. Малютина Текред 3. Тараненко Редактор А. Пейсоченко Корректоры: Т. Фисенкои А. Степанова Заказ 225915 Изд. Ьо 1541 Тираж 529 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типограии, пр. Сапунова, 2 Выход целевого продукта от исходного сырого сырья составляет 11,3% .Получение протаминсульфата. Остаток после отделения ДНК центрифугированием обрабатывают 5%-ным раствором серной кислоты в соотношении 1: 5 (вес: объем) и при медленном перемешивании оставляют на ЗО мин. Затем раствор подают в центрифугу для отделения кислых белков. Полученный раствор переносят на друк-фильтр и протаминсульфат осаждают ацетоном в соотношении 1: 3. Осадок сырца протаминсульфата очищают многократным растворением в горячей воде, подщелоченной 25 оо-ным раствором аммиака до рН 8 - 9, и центрифугированием при 100 об/мин.Очищенный раствор протаминсульфата смешивают с ацетоном в соотношении 1: 2 и препарат отделяют на друк-фильтре, Протаминсульфат сушат в сушильном шкафу при ЗО - 40 С.5 Выход протаминсульфата от исходногосырья составляет 4,боло. Предмет изобретенияСпособ совместного получения протамин сульфата и дезоксирибонуклеиновой кислоты,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что измельченные молоки, например, лососевых рыб экстрагируют раствором хлористого натрия и выделяют дезоксирибонуклеиновую кислоту из экстрак та известными приемами, а отработанные молоки экстрагируют серной кислотой и выделяют протаминсульфат известными приемами,