Способ выделения антитромбина

.10.74, Бюллетень Мв 3 сударственныи комите Совета Министров СС по делам изобретении открыт а опубликования описания 26.02.7 2) Авторы изобретения ностранцын и Магги Миллер АндерсонШвеция)ранная фирмаеболагет КабиШвеция) арс-Олоф Анде ИносАкти(71) Заявитель 4) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ АНТИТРОМБИН т декстрана-агароза; гепарин-агароза; утина-агарозы.ьные гели готовят при циана к раствору пои установлении рН оковка между молекулами мешапные гели получальфированного полисаозы (ЯерЬа 1 ех - 4 В,(й) а 1 з, 1 ррза 1 а, Ячес 1 еп) ением бромистого циа гелей облегчают регуболее высоких ско ошитые индивидуал влении бромистого харида, причем пр 1 происходит сши разование геля. С ри добавлении су и ю Изобретение относится к области медициныи касается выделения аптитромбина из продуктоц животного происхокдепия.Предложенный способ - новый, в литературе не описанный. 5Цел 4 ю изобретения является выделение антитромбина из крови, выход которого превышает 90 ооо,Эта цель достигается тем, что кровь обрабатывают сульфированным углеводом, например сшитым бромистым цианом, сульфированным полисахаридом с последующей элюциейадсорбированного антитромбица.Способ осуществляют следующим образом.Антитромбин получают при адекватном разделении от других протеинов исходного материала. ь 1 тобы получить большее количествоантитромбина, его адсорбируют из фракцииКонха при добавлении геля к раствору этойфракции. 20После адсорбции гель отфильтровывают,промывают и элюируют, После фильтрования(й)геля от элюата на 8 ср 1)адех - С 150 получают чистый антитромбин.Г 1 риерами гелей, пригодных для использования в качестве адсорбентов, являются следующие: сшитый сульфат декстрана; сшитый сульфа сшитыи гепарин; сшитая сшитый сульфат хондра харида к гелю агарР 1)агптаса Гпе С 1)еп)1 сс последующим добавлпа при рН 11, Эти типьлировапие и получение р стей, чем индивидуальные гели.П р и м е р 1. К раствору 100 мл сульфированного декстрана (20 гцг/мл) прибавляют 5 г ВгСИ, Затем повышают рН до 11 в течение 7 мин с помощью 5 М КаОН и оставляют смесь на ночь при перемешивании. Образуется паста белого гранулированного геля. Пасту набивают в небольшую колонку 5 мм (8 см и уравновешивают буфером 0,02 М ТК 18, 0,01 М соли лимонной кислоты и 0,15 М 1 чаС 1 (рН 8,5). Через колонку пропускают 2 мл нормальной плазмы, После прохода через колонку плазма теряет свою свертываемость. Колонку сначала447876 Предмет изобретения Составитель С. Малютина Техред В. Рыбакова Корректор И. Позняковская Редактор Д. Пинчук Заказ 4315 Изд. Мо 296 Тираж 482 Подписное ЦНИИПИ Государственного когяитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 промывают исходным буфером, а затем элюируют частями, увеличивая концентрацию соли до 1 М ХаС 1. Элюат содержит материал, который после диализа на фосфатном буфере удлиняет время коагуляции нормальной плазмы после повторной рекальцификации от 3 до 45 мин. Иммунологический анализ показывает наличие в элюате антитромбина и некоторых липопротеинов.П р и м е р 2, Адсорбция из плазмы с помощью геля сшитой сульфированной декстранагарозы, Градиентное элюирование.Сульфированный декстран готовят при смешивании раствора 30 мл сульфированного декстрина 15 мг/мл, 50 мл 4-ных гранул полимиризованной агарозы и 1 г ВгСХ (рН 11). Смесь выдерживают при перемешивании в течение 7 мин и поддерживают рН непрерывным добавлением ХаОН. После этого добавление щелочи прекращают, и через 5 мин рН падает до 8,5, Перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, затем гель промывают. Заполняют колонку полученной таким образом сульфированным декстраном-агарозой. На стадии адсорбции через колонку пропускают 3 мл нормальной плазмы, смешанной в соотношении 1: 1 с буфером (0,02 М трис-буфер, 0,01 М соли лимонной кислоты, 0,015 М КаС 1, рН 8,5), После прохода через колонку элюат концентрируют до 3 мл объема и испытывают 4на способность к коагуляции. Во время прохода через колонку плазма теряет свою способность к коагуляции. Адсорбированный материал десорбируют 0,02 М трис-буфером и5 0,01 М соли лимонной кислоты (рН 7,3) приизменении концентрации КаС 1 от 0,15 М,Элюат состоит из двух компонентов, одним изних является липопротеиновая фракция типапре-бета и антитромбин П 1. Идентификацию10 проводят иммунологическими и физико-химическими методами.П р и м е р 3, Адсорбция из плазмы гелемсшитой гепарин-агарозы,Гепарин-агарозу готовят, как описано в15 примере 2, для сульфированного декстранаагарозы. Вместо сульфата декстрана используют 30 мл раствора гепарина (500 мл - ).Гель помещают в колонку и проводят эксперимент, как описано в примере 2. Получают20 те же результаты. Способ выделения антитромбина, о т л и ч а ющий ся тем, что материал животного происхождения, например кровь, обрабатывают сульфированным углеводом, например сшитым бромистым цианом, сульфированным полисахаридом с последующей элюцией адсор бированного целевого продукта.