Способ определения гепарин-кофакторной активности антитромбина ш в плазме крови, содержащей гепарин

(19) (1 1462 61 К 35 16 ТЕ твенный медицинснского комсомола и А. Д. Цалихин 88.8)ез. 1 аЬога 1 ог 1 игпз - 70. Изобрете частности к использован нарушений сЦелью из точности.Способ о зом. едицине, в ожет быть иагностике ние относится к м гемокоагулогии, ио при лабораторнойвертывания крови. обретения является овышени нои т локте 3,8рия 1500 бици вали м 00ед ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБ ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬ(71) Алтайский государкий институт им. Лен(56) Н 1 епЬигдег, КагцЫа 11 ег. 1978, 2866, р. 65 уществляют следующим о олучение дефибринированной обедненромбоцитами плазмы исследуемого: из вой вены в пробирку забирали кровь с -ным раствором лимоннокислого нат- (9:1). Кровь центрифугировали при об/мин 7 мин. Снимали богатую тром- тами плазму и вновь центрифугиропри 4000 об/мин 20 мин. Надосадочслой снимали, полученную обедненную ббцитами плазму прогревали при 56 ин, затем центрифугировали при об/мин 20 мин. Надосадочный слой - ненную тромбоцитами дефибринированплазму снимали для проведения исования.(57) Изобретение относится к гематологии. Цель изобретения - повышение точности. В пробирку вносят гепарин, раствор тромбина и дефибринированную плазму пациента. Соотношение объема плазмы к общему объему смеси равно 1:11, а содержание гепарина 3,0 - 3,6 ед/мл смеси. Смесь инкубируют. В смесь добавляют раствор эуглобулиновой фракции донорской плазмы крови и регистрируют время образования сгустка. Образцы эуглобулиновой фракции стабилизированы этилендиаминтетраацетатом, их можно хранить в течение 7 - 10 дней. Получение контрольной обедненной тромцитами плазмы: образцы обедненных тромцитами плазм, полученных от 1 О здоровых норов, смешивали в равных объемах. Получение раствора эуглобулиновой фракции; в пробирку наливали 8 мл дистиллированной воды, 0,18 мл 100-ного раствора уксусной кислоты и 0,5 мл контрольной обедненной тромбоцитами плазмы. Полученную смесь инкубировали 30 мин при +4 С, затем центрифугировали 5 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость удаляли, осадок растворяли в смеси 0,1 мл 100-ного раствора этилендиаминтетрауксусной кислоты и 0,4 мл буфера Михаэлиса рН 7,8. Образцы эуглобулиновой фракции можно готовить заблаговременно и хранить их 7 - 10 сут. Для этого полученный осадок эуглобулиновой фракции хранится при ( - 20)С, а непосредственно перед использованием его размораживают и растворяют в указанной смеси.1461462 Составитель Г. БудяковаРедактор Н. Горват Техред И. Верес Корректор Л. ПилипенкоЗаказ 508/5 Тираж 644 11 одписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Производственно. издательский комбинат Патент, г. Ужгород, ул. Гагарина, 1 О 1 Построение калибровочной кривой прово или по соотношению скорости образовани сгустка в смеси с контрольной плазмо" и разведения этой плазмы. В качестве контрольной использовали обедненную тромбацитами донорскую плазму, принимая ее ак 1 гивность за 1 ООЯ, разведение в 2 раза - 50, в 4 - 25 оА; и в 8 раз - 2,5 Я.Ход определения. В отдельную пробирку в осили 0,1 мл раствора гепарина конц нтрацией 10 - 12 ед/мл, 0,2 рабочего раста ра тромбина с активностью 4 - 5 с и 0,03 мл д фибринированной, обедненной тромбоцит ми плазмы исследуемого. Полученную р агирующую смесь, в которой соотношен е объема исследуемой плазмы к общему о ъему смеси равно 1:11, а содержание гепар на 3,0 - 3,6 ед/мл смеси инкубировали при 3 С 3 мин, затем добавляли 0,2 мл раствор эуглобулиновой фракции и тотчас включ ли секундомер. Регистрировали время обр зования сгустка. По калибровочной кривой определяли гепарин-кофакторную активность АТ 111 в плазме крови (Я).Воспроизводимость способа о=-1-6,3 о, известного способа а=+11,6 Я. Формула изобретенияСпособ определения гепарин-кофакторной активности антитромбина 111 в плазме крови, содержащей гепарин, путем получения обедненной тромбоцитами плазмы, инкубации ее с тромбином с добавлением избытка гепарина и вещества, индуцирующего образование сгустка, и регистрации времени образования сгустка, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, 15 плазму дополнительно дефибринируют, гепарин добавляют в концентрации 3,0 - 3,6 ед. на 1 мл смеси при соотношении объемов плазмы и смеси, равном 1;11, а в качестве вещества, индуцирующего образование сгустка, применяют эуглобулиновую фракцию донорской плазмы крови, стабилизированную этилендиаминтетраацетатом.