Способ получения липопротеидлипазы

О П И С А Н И Е (11)43993ИЗОБРЕТЕН Ия К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(21) 1819924/28-13 присоединением заявки-государственный комитетСовета 1 иинистрое СССРоо делам изобретенийи открытий 2) Приорит 57а опубликован 72) Автсргн изобретен олесникова, В, А. Яковлев, Т, П, Левчук, В, А. Вовк и Н, С. Акатова Институт микробиологии АН СССР и Всесоюзныйнаучно-исследовательский витаминный институт 71) Заявители ЛУЧЕНИЯ ЛИПОПРОТЕИДЛИПАЗЬ 4) СПОСО ментной прособам получебесспоровые.пс. Имеет по- в количестве ясной бульоПептон люкоза 1,0 Изобретение относится к фермышленности, в частности к спония липопротеидлипазы.Известны способы получения лппопротеидлипазы путем культивирования бактерий рода Рзеис 1 огпопаз, например Рзепс 1 оптопаз аегпрпоза, Рзеис(огпопаз Пиогезсепз, в аэробных условия па питательной среде, содержащей источники углерода (глюкозу), азота (мясной бульон, пептон), индуктор (оливковое масло) и минеральные соли (КНеРОсь Мр 804),С целью повышения выхода фермента по предлагаемому способу в качестве продуцента липопротеидлипазы из бактерий рода Рзеис 1 огпопаз используют вид Рзеидогпопаз аш ап(1 аса, а,в качестве индуктора - хиломикроны.При этом из вида Рзепс 1 отопаз апгап(1 аса используют штамм ИНМИ-К.П р.и м е р. Посевную культуру Рзецс 1 огпопаз ацгап 1 аса ИНМИ-,К выращивают иа круговой качалке в течение 24 час. при 28 С на среде. содерокащей 1% мясного бульона и 0,1 искусственных хиломикронов.Затем полученный посевной материал в количестве 5 мл переносят в колбы, содержащей 50 мл питательной среды следующего соста 0,5 15 КН.РО 0,2съоО 0,05Хиломикроны 0,1Вола Остальноеи осуществляют культивирование прп 28 С накруговой качалке при 200 - 300 об/мпн, в те.чение 48 час. Через 48 час в среде накапли.вается липопротеидлипаза в количестве 0,5 гна 1 л.Выход фермента определяют тситрованиемосвобождающихся при гидролизе хиломикро.нов высших жирных кислот по методу Дола.При пересчете на граммы удельная активностьлипопротеидлипазы равна 2500 мк.моль выс 15 шпх жирных кислот (час) мг. белка.Фермент липопротеидлипаза, как и липаза,является гидролазой триглицеридов, но в от.лпчие от обычных липаз гидролизует триглпцериды, входящие з состав хиломикронов и20 других липопротеидов плазмы крови с оченьнизкой плотностью. Полученный фермент может оыть применен в медицине для лечениянарушений липидного обмена, а также в производстве вакцин.25 Характеристика штамма Рзецс 1 опчопазапгап 1 аса ИНМИ-К, Штамм выделен пзюжных почв Советского Союза,Морфология, Палочки мелкие,подвижные, размером 2 - 3)(0,5 .зо лярно расположенные жгутики439513 Предмет изобретения Составитель Т. ПолянскаяТехред Е. Борисова Корректор Л. Орлова Редактор В. Блохина Заказ 118 Изд. М 1950 Тираж 456 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., л, 4/5Обл, тнп, Костромского управления издательств, полиграфии н книжной торговли о - 7 штук, Грамотрицательный.Культуральные и физиолого-биохимическиепризнаки,На мясопептонном агаре образует крупныеблестящие колонии оранжевого цвета, В субстрат выделяет оранжево-красный флуоресцирующий пигмент. На мясопептонном бульонеооразует обильную муть оранжевого цвета икольцо на стенках пробирки. Штамм синтезирует смесь окрашенных флуоресцирующих и 10нефлуоресцирующих пигментов различного химического состава. Хорошо растет на средахс картофелем и солодовом сусле. Штамм хорошо растет с образованием пигмента прои 28 С,при 4 С наблюдается рост, но без образования 15пигмента.Желатину разжижает.Молоко пептонизирует.Крахмал и клетчатку не разлагает.Индол и сероводород не образует. 20Отношение к источнику углерода.Использует с подкислением среды арабинозуксилозу, глюкозу, маннозу, галактозу,фруктозу, мальтозу, сорбит, маннит и глице 25Ассимилирует лимонную, янтарную, фумаровую, глюконовую, 2-кетоглюконовую кислоты.Не растет на синтетических средах с углеводородами и ароматическими соединениями (бен- зо зойной, салициловой, пт-аминобензойной кислотами, фенолом) за исключением антраниловой кислоты,Источники азота. Использует хлористый аммоний, мочевину и аминокислоты.Аэроб, гомоферментативен.Проверка патогенности Рзецдогпопаз проводилась сравнительно с условно патогенными штаммами Рзецдогпопаз аегцрпоза. Внутрибрюшинное введение суспензии Рзецдогпопаз ацгап 11 аса ИНМИ-К не вызвало гибели мышей, в то время при введении суспензии Рзецдогпопаз аегцрпоза погибло 90/, мышей. 1. Способ получения липопротеидлипазы путем аэробного культивирования бактерий рода Рзецс 1 оптопаз на питательной среде, содержащей индуктор фермента, источники углерода, .азота и минеральные соли, с последующим выделением фермента из культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода фермента, в качестве продуцента липопротеидлипазы из бактерий рода. Рвецдогпопаз используют вид ацгап 11 аса, а в качестве индуктора - хиломикроны.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что из вида Рзецдогпопаз ацгап 11 аса используют штамм ИНМИ-К.