402540

"5 сесо ; ., - ейтентно-т1 МьЯ6 кб;,иск,зи,Б л 402540 ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Сеюэ Севетеких Социал истинеских РеспубликЗависимое от авт. свидетельстваЗаявлено 07 Л 11,1971 ( 1688317/30-15)с присоединением заявкиПриоритет М. Кл, С 120 13/06 Государственный номитет Совета Министров СССР оо делам изобретений ц откоытийХ,1973. Бюллетень4 УДК 547,466(088,8 публиков ата опубликования описания 10.1 Ъ.197 вторызобретения Н. В, Сафонова, Г. А, Котова, М, В, Волкова,Л, И. Игнатьева, А. Д. Гололобов и С. В. Чепиго Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтез белковых веществаявител СПО ОЛУЧ ЕНИЯ 1.-Л ИЗ И НА Изобретение относится к химико-микробиологическим способам получения биологическиактивных веществ, а именно к получению 1 лизина.Известен способ получения 1-лизина путем 5декарбоксилирования а и в-диаминопимелиновой кислоты с помощью фсрмептного препарата с последующим выделением продуктана ионообменных смолах.Однако недостатком известного способа является невысокий выход и недостаточнаячистота 1.-лизина.С целью увеличения выхода и,повышениячистоты продукта по предлагаемому способув качестве ферментного препарата используют сухую биомассу бактерий - отход производства 1.-лизина,В,качестве ферментного препарата используют сухую биомассу Вгеч 1 Ьас 1 епцпт 22 и сухую биомассу М 1 сгососсцв д 1 Шагп 1 сцв 28. 20Предлагаемый способ осуществляют следующим образом,Биомассу Вгеч 1 Ьас 1 епцпт 22 и М 1 сгососсцзд 1 ц 1 агп 1 сцз 28 (продуцентов лизина) после отделения от культуральной жидкости подвергают обработке ацетоном и высушивают довоздушно-сухого состояния.Получение ферментного препарата осуществляют обработкой клеток ацетоном на холоду при соотношении биомассы (сыр. вес): 30 ацетон=1: 1,6. При этом получают порошок серого цвета, сыпучий, хорошо транспортабельный. При хранении его при температуре +4 - 6 С активность фермента нс изменяется в течение одного года, Полученный препарат содержит активный фермент - декарбоксилазу ДГ 1 К (днамипопимелатдскарбоксилиазу), превращающий мезо-я, е-ДПК в лизин. Реакцию декарбоксилирования проводят в инкубационной среде, содержащей 2 - 4% ДПК (соотношение ДПК: фсрментный препарат= =1: 0,75, 1; 0,5), буферфосфатный 0,15 М, рН - 7,0, кукурузный экстракт - 0,5% по сырому весу (источник коэнзима), температура - 37 С, продолжительность процесса - 16 - 20 час, при непрерывном псрсмсшивании с добавлением толуола (0,75% по объему) в качестве антисептика. По окончании ферментации ферментный препарат отделяют от инкубационной среды, и он может бьть использован повторно, при этом его активность сохраняется до 7 О%,Так как декарбоксилированию подвергается только мсзоформа ДПК, составляющая 50% в синтетической ДПК, выход лизина от исходного количества мезоформы - 100%,Оставшийся пссле декарбоксилирования рацемат ДПК подвергают реакции эпимеризации с целью получения мезоизомера, который тоже может быть подвергнут повторномуЗаказ 1374 7 Изд. М 1093 Тираж 467 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 декарбоксилированию до .-лизина, увеличивая использование ДПК до 70 оо. Эпимеризацию рацемата ДПК проводят на смоле Дауэкс, в Н+ или смоле КУК 20 в Н+ форме, нагревая смолу, насыщенную рацематом Д 11 К при температуре 180 С в течение 5 - 6 час; в результате образовавшийся мезоизомер вновь подвергают декарбоксилированию.Выделение .-лизина из инкубационной среды проводят на ионообменных смолах с применением водной кристаллизациями, после окончания процесса декарбоксилирования.Так как инкубационная смесь помимо лизина и ДПК содержит значительно меньшее количество других компонентов, чем культуральная жидкость после микробиологического синтеза, выделение лизина менее трудоемко и не требует дополнительной очистки,После выделения и сушки получают кристаллический или порошкообразный препарат, содержащий 90 - 98 о/о 1.-лизина,Предлагаемый способ обеспечивает утилизацию отходов микробиологического производства лизина, При этом сокращается продолжительность процесса, который проводят в нестерильных условиях, а чистоты продукта достигают, минуя стадию дополнительной очистки. А также способ позволяет организовать непрерывный процесс получения 1.-лизина.П р и м е р 1. В колбу емкостью 250 мл вносят 100 мл фосфатного буфера 0,06 М, р 1- 7,0, 4 г,а, в=ДПК, 2 г ферментного препарата, 0,5 г кукурузного экстракта (по сырому весу) и 0,75 мл толуола.Процесс проводят на качалке (100 об/мин) при температуре 37 С в течение 20 час.В результате процесса в инкубационной среде накапливается 2 г 1.-лизина. Взвешенные частицы отделяют от инкубационн:и среды центрифугированием, Фильтрат пропускают через катионит, Сорбированный лизинэлюируют воднысм раствором аммиака. Из5 элюата путем выпаривания удапяЮт аммиаки добавляют НС до рН 3,5 - 4,5. При этомоснование лизина переводят в мрнохлоргидрат, Готовый продукт содержит 93 лизина.П р и м е р 2. Реакцию декарбоксилирова 10 ния проводят в ферментере емкостью 5 л, содержащем 1 л инкубационной среды:ДПК - 40 г, ферментный препарат - 30 г,кукурузный экстракт - 5 г, толуол - 7,5 мл(дробно, каждые 2 час по 1 мл),15 (ГН 4)НР 04 - 6,2 г; 1 Н 4 Н 2 Р 04 - 2,3 г, вода дистиллированная - 1 л.Процесс декарбоксилирования осуществляют в течение 16 час при постоянно работающей мешалке (400 об/мин), при температуре20 37 С,Выделение лизина осуществляют так же,как в примере 1. Выход лизина - 19,8 г. Предмет изобретения 25 1. Способ, получения 1.-лизина путем декарбоксилирования а и в-диаминопимелиновой кислоты с помощью ферментного препарата с последующим выделением продукта на ионообменных смолах, отличающийся тем, что, с 30 целью увеличения выхода и повышения чистоты продукта, в качестве ферментного препарата используют сухую биомассу бактерий - отход производства 1.-лизина.2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что, 35 в качестве ферментного препарата используют сухую биомассу ВгеиЬас 1 ег 1 цгп 22.3, Способ по п. 1, отличающийся тем, чтов качестве ферментного препарата используют сухую биомассу М 1 сгососсцз д 1 цаппсцз 28.