Способ количественного определения гормонального препарата в мясных тканях

Союз Соеетсиия Ссциалистичесния РеспубликЗависимое от авт. свидетельстваЗаявлено 07.Ч.1971 ( 1658344/28-13)с присоединением заявкиПриоритетОпубликовано 05.1 Ч.1973. Бюллетень17Дата опубликования описания 26 Ч 1.1973 М. Кл. С 01 п ЗЗ/12 Комитет по делам изобретений и открыт при Сосете Иинистро СССР. Ф. Адигамо явите СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОРМОНАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА В МЯСНЫХ ТКАНЯХопределения препарата из ведут методом соль(мышц, печени илиды (по 40 мл при Изобретение относится к мяснои промышленности, а именно к способу количественного определения метандростенолона в мясе исубпродуктах,Известен способ количественного определения гормональных препаратов в мясных тканях путем экстракции препарата из тканей,хроматографической очистки и последующегоспектрофотометрического и денситометрического исследования,Однако известный способ не обеспечиваетдостаточной точности анализа.Для устранения этого недостатка в предлагаемом способе перед хроматографическойочисткой проводят перераспределение препарата в смеси 70%-ного метанола и гексана, ахроматографическую очистку ведут адсорбционным методом в три стадии, первую из которых осуществляют на колонке окиси алюминия, а вторую и третью - в тонком слое силикагеля.При этом экстракцию проводят в три стадиихлороформом при 45 С.Кроме того, дляв субпродуктах гидролволиза.Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.Берут 20 г мясной тканипочек), измельчают и триж 45 С) экстрагируют хлороформом (100 мл, 50 мл и 50 мл хлороформа соответственно) при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Хлороформные экстракты объеди няют и фильтруют через бумажный фильтр,Фильтрат промывают 0,1 н. ИаОН (1/10 объема) и 2 - 3 раза дистиллированной водой (1/10 объема) до нейтрального рН, обезвоживают фильтрованием через 1 чаз 304 и высу шивают в вакууме. Сухой экстракт растворяют в 30 мл 70%-ного водного раствора метанола и интенсивно встряхивают в делительной воронке с 8 мл гексана. Гексан дважды промывают равным объемом 70%-ного мета иола. Объединенные растворы метанола выпаривают в вакууме при 45 С. Водный остаток экстрагируют 3 раза двойным объемом этилацетата. Этилацетатные экстракты выдерживают 10 - 12 час (2 - 4 С), Нижний слой 20 отбрасывают, этилацетат отгоняют в вакууме.Сухой остаток растворяют в 5 мл бензола инаносят на колонку окиси алюминия (адсорбент стандартизован добавлением 10% воды); используют колонки размерами 0,8 7,5 см, 25 Последовательность элюции: 10 мл бензола,:,376719 Предмет изобретения Составитель С. БелаяТехред Т. Курилко Корректор Е. Талалаева Редактор Е. Сотник Заказ 1778/13 Изд.421 Тираж 755 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 элюируют 10 мл 1,5%-ного раствора этанолав бензоле (17 фракция), эту фракцию выпаривают в вакууме при 45 С, и приводят тонкослойную хроматографию на силикагелеКСКв одной из систем растворителей гексан - этилацетат или циклогексан - этилацетат(с нанесенным стандартом). Слой адсорбентаразрезают на 1 см выше и ниже пятна стандарта. Полученные в виде равных по площадипрямоугольников участки слоя и два контрольных пустых участка используют дляэлюции,Элюцию проводят 15 мл этанола (30 мик)и 15 мл метанола (30 мин) на магнитной мешалке при 45 С. Затем адсорбент переносят 15на стеклянный фильтр Ма 4 и под небольшимвакуумом пропускают смесь этанола и метанола (1: 1) до сих пор, пока фильтрат не поглощается при Х = 245 ммк. Объединенныеэкстракты выпаривают в вакууме, осадок растворяют в 4 мл метанола и определяют оптическую плотность при Х = 245 имк (1-е количественное определение),После спектрофотометрического исследования метанол выпаривают в вакууме; осадок 25растворяют в минимальном объеме 30-ногометанола в бензоле и количественно наносятна пластину силуфола, На пластину также наносятся различные количества стандартногопрепарата метандростенолона. Хром атогра- ЗОфирование проводят с использованием системы растворителей: циклогексан - этилацетат(1: 1). Для проявления стероида используютраствор (3 мл на 1 пластину), содержащийконцентрированную серную кислоту, ледяную 35уксусную кислоту, формальдегид, воду в соотношении - 10,0: 5,0: 0,5: 84,5.Пластину силуфола прогревают под лампойв течение 40 сек трижды с пятиминутным интервалом. Затем пластину выдерживают 40 30 сек над водяной оаней для просветления фона и прогревают повторно.Денситометрию пятен проводят в отраженном свете, используя экстинкционно-регистрирующий прибор ЕИ = 65, Кривые экстинкции экстраполируют по кривым распределения Гаусса и по интегральной кривой рассчитывают процентное содержание каждого компонента, Рассчитывают количество метандростенолана с учетом его процентного содержания и количество нанесенного стандарта (2-е количественное определение) .При определении метандростенолона в субпродуктах перед очисткой препарата проводят гидролиз методом сольволиза,1. Способ количественного определения гормонального препарата в мясных тканях, преимущественно метандростенолона, путем экстракции препарата из ткани, его хроматографической очистки и последующего спектрофотометрического и денситометрического исследования, отличающийся тем, что, с целью повышения точности анализа, перед хроматографической очисткой препарата проводят его перераспределение в смеси 70 о/,-ного метанола и гексана, а хроматографическую очистку ведут адсорбционным методом в три стадии, первую из которых осуществляют на колонке окиси алюминия, а вторую и третью - в тонком слое на силикагеле.2, Способ по п, 1, отличающийся тем, что экстракцию проводят в три стадии хлороформом при 45 С.3. Способ по п, 1, отличающийся тем, что для определения препарата в субпродуктах перед очисткой препарата осуществляют его гидролиз методом сольволиза.