Способ культивирования микроорганизмов

339191 ОП ИСАЙ И Е ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ," Союз Советских Социалистических Республикависимое от авт, свидетельстваЗая влено 30,1. Кл. С 12 Ь 1(22 1 ( 1634070/28-13) исоединением заявкиГасударственный камитеСаввтв Министрав СССРаа делам изабретенийи аткрытий Приор ит663.14.039,35(088.8) 973. Бюллетень42 публиковано 19 Дата опубликования описания 16.111.197 Авторы изобретен Л. Б, Рубин, О, В, Еремеева и А уб осковский государственный университе им. М. В. Ломоносовааявител ПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМО б етеп в (ином осве 300 - тенсивсмсек,вызы- процесов, наи ускоия при Йзобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к способам культивирования микроорганизмов.Известен способ культивирования микроорганизмов, включающий подготовку посевной культуры, засев ее на питательную среду и освещение светом видимой области.Предлагаемый способ позволяет интенсифи. цировать процесс биосинтеза, повысить выход продуцируемых микроорганизмами веществ и ускорить отдельные стадии цикла развития, Это достигается тем, что освещению подвергают посевную культуру перед ее посевом на питательную среду, причем освещение проводят светол спектрального диапазона 300 - 650 нм, интенсивностью не более 5 - 10 эрг/см сек в течение от 1 до 30 мин. Сущность изо р ия заключается в сдующем,Посевной материал микроорганизмокулят) непосредственно перед посевошают светом спектрального состава650 нм в течение от 1 до 30 мин, Инность света не превышает 5 10 эрг/Предпосевное освещение инокулятавает значительную интенсификациюсов жизнедеятельности микроорганизмпример биосинтеза белка, витаминов,рения отдельных стадий цикла развит посеве микроорганизмов на культуральную среду.Для ряда микроорганизмов, напримерРзецдогпопаз 11 цогезсепз, С 1 оз 1 ги 11 цгп Ьц 11 г 1- сцгп, ЯсЬ 1 гозассЬагопусез рогпЬе, обнаружен стабильный эффект увеличения выхода белковых продуктов до 75%, повышения скорости клеточного деления до 170%, сокращения продолжительности лагфазы почти в два ра за (с 6 час до 3,5 час), увеличения выходавитамина Ве до 130%. Свет спектрального состава 300 - 390 нм играет основную роль в интенсификации процессов биосинтеза у микроорганизмов.Одна из основных особенностей предлагаемого способа заключается в использовании в опытах культур микроорганизмов, находящихся в строго определенном физиологическом возрасте.20 Пример 1. Культуру Рзецсогпопаз 11 цогезсепв дважды пересевают на мясопептонном бульоне с 0,1% селитры. Третий пересев производят с таким расчетом, чтобы к началу опыта посевной материал имел возраст 18 час.Получешый посевной материал разливают в кварцевые пробирки и освещают 1 - 30 мин монохроматическим светом от лампы ДРШ. После этого производят посев облученных и необлученных образцов на среду О (МПБ+0,1% КО)0,), которую разливают в3пробирки. На поверхность среды наносят слой парафина для создания строго ацаэробцых условий. После посева все образцы с освещенными культурами Р, 1 цогевсепз помещаот в зермостат при,30"С. В момент выхода ца стаццоцарцую фазу развития в культуре определя 1 от общее содержацие белка и подсчитываот количество клеток.11 р имер 2. Используют споровый материал Соз 1 пс 11 цп 1 Ьц 11 гсцп 1, который получают следующим образом. 25 "/о-цый картоельцый затор разливают высоким слоем в пробирки, ца дце которых находится немного мела. Перед посевом среду црогревают 40 - 60 миц ца кипящей водяной бане. После охлаждеция пробирок до 30 - 40"С в каждую из цих ца дцо вносят 0,2 мл спорового материала, Брожение продолжается 7 - 10 дней при 37 С, 1 о окончании брожения пробирки запацвают и хранят в темцоче, Перед постановкой опыта споры проращивают ца глюкозо-пептоццой среде; глюкоза 2% пептоц 1/о, КНвР 04 0,1/о, мел ца дце пробирок, водопроводная вода. Перед посевом среду прогревиот, как в примере 1. Посевной материал в количестве% от объема среды вносят ца дцо кварцевой пробирки и выращивают 24 час в темноте при 37 С. Кварцевые пробирки с посевцой культурой освещают светом от лампы БУВв течение 1 - 30 миц или моцохроматическим светом от лампы ДРШ. Из облучеццых и иеоблу ицшых образцов С 1, Вц 11- псцгп производят посев ца синтетическую среду с 1% глюкозы, 0,1 о/о фумаровой кислоты, 0,3/, (МН,),НР 04, калием в составе К 01-1 140 мг/мл, биотццолом - 0,001 мг/мл, рН среды 6,7 - 6,8, Затем все образцы со свежезасеяццыми культурами С 1, ЬИ 11 псцгп помещают в темцовой термастат при 37 С, Через 21 час роста в момент окоцчация экспотецциальцой фазы развития в культуре определяют общее содержание белка и подсчитывают количество клеток. ззйоПример 3. Используют инокулят 5 сЬ 1 гозассЬагогпузез рогпЬе, который перед опытом дважды пересевают ца среде Ганзена; 10 г пептоиа, 3 г КН 2 Р 04, 4 г Мт 504 7 Н,О, 20 г глюкозы в 1000 мл дистиллированной воды.1 ретий пересев производят с таким расчетом, чтобы к началу опыта ицокулят был в возрасте 24 час, После этого ицокулят освещают 1 - 30 миц моцохроматическим светом от лам пы ДРШ, Освещенные и неосвещенныеобразцы Яс 1 ь рогпЬе пересевают в колбы со средой Ридера, разлитои тонким слоем для хорошей аэрации.Затем все образцы со свекезасеяццымикультурами помещают в темцовой термостат цри 30 С. Через 16 час роста последцяя треть экспотецциальцой фазы) в культуре определяют общее содержание белка и подсчитывают количество клеток.В приведенных примерах общее содержаниебелка определяют по Лоури, а количество клеток подсчитывают по Вицоградскому, Ошибка в определении процента стимуляции образования общего белка в опыте цо сравцецию с контролем це превышает 4/о, а при подсчете клеток - 5%. Определение количества витамина В, проводят ца флуорометре.Предмет изобретеция301. Способ культивирования микрооргациз.сион, включающий подготовку посевной культуры, засев ее ца питательную среду и освещецие светом Видимой Области, Отличающийся тем, что, с целью повышения выхода продуцируемых микроорганизмами веществ и ускореция отдельных стадий цикла развития, освещению подвергают посевную культуру перед ее посевом ца питательную среду.2. Способ по и. 1, отличающийся тем, чтоосвещение проводят светом спектрального диапазона 300 - 650 цм интенсивностью не более 5 10 эрг/смсек в течение 1 - 30 миц, Составитель М, ЛаринаРедактор Г. Бялобжевская Техред Т. Ускова Корректор Е. ХмелеваЗаказ 518/4 Изд.1015 Тираж 467 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Типография, пр, Сапунова, 2